纈草屬常用藥用植物形態(tài)特征、光譜鑒別及ITS序列研究.pdf

1、為了確定我國(guó)纈草屬常用藥用植物的主流品種并對(duì)其進(jìn)行分類(lèi)學(xué)研究及藥材鑒別，本文從基于植物外在表型的形態(tài)特征、基于內(nèi)部物質(zhì)組分的光譜特征和基于物種遺傳基因的。DNA分子標(biāo)記三個(gè)層面入手，通過(guò)品種考證、資源調(diào)查、形態(tài)指標(biāo)聚類(lèi)分析、顯微觀察、紫外、紅外光譜分析、ITS序列分析等手段對(duì)我國(guó)常用的5種纈草屬植物及歐纈草進(jìn)行比較研究，得出如下結(jié)果： (1)品種考證結(jié)果認(rèn)為纈草在我國(guó)歷代本草中尚未發(fā)現(xiàn)記載，而蜘蛛香自明代始載。我國(guó)纈草屬有文獻(xiàn)記

2、載藥用情況的共9種植物，其中藥用廣泛、產(chǎn)量規(guī)模較大且研究報(bào)道較為集中的為纈草V.pseudofficinalis C.Y. Cheng et H.B.Chen、寬葉纈草V.officinalis L.var.latifolia Miq.、黑水纈草V.amurensis Smir.ex Komarov、蜘蛛香V.jammansi Jones和長(zhǎng)序纈草V.hardwickii Wa11.5種，此外歐洲的纈草品種V.officinalis L

3、.在我國(guó)尚有栽培。前三者及歐纈草均作藥材纈草入藥，后二者分別成為不同的藥材品種。上述6種植物中，國(guó)產(chǎn)纈草、寬葉纈草與歐洲產(chǎn)纈草一直存在分類(lèi)學(xué)爭(zhēng)議。 (2)通過(guò)對(duì)北京松山、四川峨眉山、湖北恩施三個(gè)典型纈草屬植物生境調(diào)查，記錄了纈草、蜘蛛香、寬葉纈草、長(zhǎng)序纈草的生長(zhǎng)環(huán)境及習(xí)性。由于湖北恩施寬葉纈草資源非常豐富，又因當(dāng)?shù)赝寥栏晃迷訜晒夥y(cè)得其藥材含硒量較高，達(dá)0.2 mg/kg以上，有望作為特色道地藥材開(kāi)發(fā)。同時(shí)調(diào)查了當(dāng)?shù)貙捜~纈

4、草栽培技術(shù)研究進(jìn)展。 (3)通過(guò)核查大量標(biāo)本，描述了上述6種纈草形態(tài)。并通過(guò)形態(tài)指標(biāo)聚類(lèi)分析，認(rèn)為纈草與歐纈草為不同種，而寬葉纈草為纈草種下等級(jí)，由于存在大量過(guò)渡種，尚不能確定我國(guó)不出產(chǎn)歐纈草。上述種的主要分類(lèi)區(qū)別為葉裂片數(shù)及裂片形態(tài)。通過(guò)對(duì)其果實(shí)顯微觀察，利用其大小、形狀、被毛情況、基部是否偏斜或凹陷、表面色斑及斑點(diǎn)等特點(diǎn)可將6種區(qū)分；通過(guò)對(duì)其花粉粒電鏡觀察，利用其大小、形狀、孔溝及刺狀雕紋形態(tài)可將6種區(qū)分，且都表明寬葉纈草與

5、纈草相似，二者與歐纈草不同。 (4)首次進(jìn)行6種纈草20個(gè)樣品的水、乙醇、氯仿、石油醚紫外譜線組研究，發(fā)現(xiàn)其高極性溶劑譜線形態(tài)能夠體現(xiàn)種間差異和種內(nèi)穩(wěn)定性，可作為纈草屬不同品種藥材的鑒別依據(jù)；低極性溶劑譜線峰在一定程度上反映了其內(nèi)在質(zhì)量；通過(guò)峰位及峰值的聚類(lèi)分析，可明顯分為纈草類(lèi)、長(zhǎng)序纈草類(lèi)、蜘蛛香類(lèi)三類(lèi)藥材，與藥用情況一致；而紫外譜線組的特征可作細(xì)致種間區(qū)分。首次對(duì)以上樣品粉末直接壓片進(jìn)行傅立葉變換中紅外光譜研究，其譜線特征種

6、間穩(wěn)定，可用于鑒別，同時(shí)某些精細(xì)結(jié)構(gòu)可反映地域區(qū)別。 (5)首次優(yōu)化了纈草屬藥材DNA提取方法和ITS序列PCR擴(kuò)增條件，設(shè)計(jì)出特異引物。通過(guò)對(duì)上述6種纈草屬植物ITS序列分析，發(fā)現(xiàn)全長(zhǎng)為642-644bp，其中工TS1為233-234bp，5.8S為160bp，ITS2為249-250bp，而5.8S片段序列完全一致。其中纈草屬內(nèi)相似度在95.8-99.5％之間，相互差異最小的三個(gè)種是纈草、歐纈草和寬葉纈草，支持了纈草與歐纈草