黎藥黃連藤的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及藥理作用研究.pdf

1、目的:(1)建立黃連藤質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);(2)選擇黃連藤生物堿的最佳提取純化工藝;(3)明確黃連藤醇提物(AE)的急性毒性及藥理作用。
　　方法:(1)采用性狀、顯微、理化、薄層鑒別對(duì)黃連藤進(jìn)行生藥學(xué)研究，為藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立提供一定依據(jù);(2)采用酸性染料比色法和鹽酸甲醇比色法對(duì)黃連藤總生物堿含量進(jìn)行測(cè)定;(3)采用HPLC測(cè)定黃連藤中鹽酸小檗堿含量;(4)單因素實(shí)驗(yàn)聯(lián)合正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)化黃連藤總生物堿提取工藝;(5)采用001×7型強(qiáng)酸性苯

2、乙烯系陽(yáng)離子交換樹(shù)脂富集AE總生物堿，確定純化工藝;(6)通過(guò)測(cè)定MDT研究AE的急性毒性。(7)應(yīng)用二甲苯誘發(fā)的小鼠耳腫脹、角叉菜膠誘發(fā)的大鼠足腫脹和大鼠棉球肉芽腫模型研究AE的抗炎作用;(8)通過(guò)小鼠熱板實(shí)驗(yàn)、醋酸扭體實(shí)驗(yàn)研究AE的鎮(zhèn)痛作用;(9)采用大鼠酵母發(fā)熱實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)AE的解熱作用;(10)通過(guò)氨水引咳實(shí)驗(yàn)和氣管酚紅排泌實(shí)驗(yàn)研究AE的止咳祛痰作用;(11)通過(guò)研究AE對(duì)番瀉葉致泄小鼠和正常小鼠腸功能的影響評(píng)價(jià)其止瀉作用;(12)

3、采用煙熏法制備慢性支氣管炎的大鼠模型，HE染色觀察AE給藥組大鼠支氣管的病理組織改變，生化法檢測(cè)各組大鼠肺組織和血清中SOD的活性以及MDA的含量變化，來(lái)評(píng)價(jià)AE對(duì)慢性支氣管炎大鼠的治療作用;(13)采用乙酸灌腸法制備結(jié)腸炎(UC)大鼠模型，觀察AE對(duì)大鼠的一般情況及組織形態(tài)學(xué)影響。
　　結(jié)果:(1)提出了黃連藤藥材性狀和顯微、理化、薄層鑒別特征;(2)酸性染料比色法測(cè)定黃連藤總生物堿含量為2.13％，鹽酸甲醇比色法測(cè)定黃連藤總生

4、物堿含量為1.62％;(3) HPLC測(cè)定黃連藤鹽酸小檗堿含量為0.98％，鹽酸小檗堿含量在0.075～0.375μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r值為0.9999，平均加樣回收率為98.7％;(4)黃連藤總堿最佳提取條件為:70℃下，70％的乙醇，料液比1∶10，提取3次，每次1h;(5)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂對(duì)AE純化的最佳工藝為:12倍量1％鹽酸浸漬24h，過(guò)濾，所得溶液加純化水調(diào)整濃度為5.817mg·ml-1，調(diào)孳pH3.0，以1ml·min

5、-1的流速上樣，上樣飽和后用純化水沖洗至流出液與10％硅鎢酸試劑呈陰性反應(yīng)為止，之后以30BV80％乙醇-10％氨水溶液洗脫。純化后總生物堿含量可達(dá)50％以上;(6)小鼠對(duì)黃連藤的MDT為408g· kg-1，相當(dāng)于50kg體重人臨床使用計(jì)量的1360倍;(7)AE可以抑制小鼠耳腫，能明顯抑制大鼠足腫和肉芽腫;(8)AE可以顯著提高小鼠痛閾并減少小鼠扭體次數(shù);(9)AE對(duì)發(fā)熱大鼠的解熱作用顯著;(10) AE能明顯延長(zhǎng)引起半數(shù)小鼠咳嗽的

6、氨水刺激時(shí)間，并明顯增加小鼠氣管酚紅排泌量;(11) AE可以顯著減輕番瀉葉引起的小鼠腹瀉，并對(duì)正常小鼠的腸功能推進(jìn)有顯著抑制作用;(12) AE可以明顯改善給藥組大鼠的肺部病理組織變化，減輕支氣管粘膜上皮脫落和炎細(xì)胞浸潤(rùn)等癥狀。使大鼠肺及血清中的SOD含量明顯降低，MDA含量明顯升高;(13)高劑量AE能顯著改善乙酸誘導(dǎo)的大鼠UC癥狀，明顯減輕結(jié)腸黏膜組織形態(tài)學(xué)損傷
　　結(jié)論:(1)建立了黃連藤生藥材的顯微、理化及TLC鑒別方法

7、;(2)建立了UV法測(cè)定黃連藤中總生物堿和HPLC法測(cè)定黃連藤中鹽酸小檗堿含量的方法，兩種方法穩(wěn)定性和重現(xiàn)性較好，可用于黃連藤藥材的質(zhì)量控制;(3)優(yōu)選出AE總生物堿的提取純化工藝，經(jīng)純化后總生物堿含量高于50％，可達(dá)到純化目的;(4)黃連藤有顯著的抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱、祛痰、止瀉作用，在臨床使用劑量范圍是非常安全的;(5)AE對(duì)實(shí)驗(yàn)性慢性支氣管炎大鼠具有治療作用，可通過(guò)清除自由基，提高機(jī)體抗氧化損傷能力而減輕氣道炎癥反應(yīng);(6)高劑量AE