楊梅樹皮、楊梅葉和楊梅果體外抗氧化物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、楊梅(Myrica rubra(Lour.) Sieb.et Zucc.)系楊梅科（Myricaceae）楊梅屬（Myrica）多年生常綠喬木。楊梅樹皮、葉、果具有抗氧化、神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)以及抗腫瘤等多種藥理活性。本論文將探討楊梅樹皮、葉和果發(fā)揮體外抗氧化活性的物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　首先采用化學(xué)評(píng)價(jià)和細(xì)胞評(píng)價(jià)分別對(duì)楊梅樹皮、葉和果提取物進(jìn)行體外抗氧化能力評(píng)價(jià)?；瘜W(xué)評(píng)估法選擇自由基清除法(DPPH·)和總還原能力測(cè)定法(FRAP)，以上實(shí)驗(yàn)得

2、到的抗氧化活性順序?yàn)?樹皮＞果＞葉;細(xì)胞評(píng)價(jià)法采用H2O2誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型，MTT檢測(cè)結(jié)果表明:楊梅樹皮提取物在25-50μg/ml、楊梅果提取物濃度≥50μg/ml具有明顯的細(xì)胞保護(hù)活性，而楊梅葉提取物則無明顯保護(hù)作用。流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果亦證明:楊梅樹皮和楊梅果提取物均具有明顯的抗細(xì)胞凋亡作用，而楊梅葉無明顯抗細(xì)胞凋亡作用。相關(guān)氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測(cè)表明:楊梅樹皮和楊梅果提取物能夠顯著地抑制H2O2引起的PC12細(xì)胞內(nèi)ROS

3、的增多和MDA的形成，并增加H2O2引起PC12細(xì)胞內(nèi)SOD的降低?；瘜W(xué)和細(xì)胞體外抗氧化活性評(píng)價(jià)均證明楊梅樹皮具有良好的抗氧化作用。
　　為深入了解楊梅樹皮的化學(xué)成分，進(jìn)一步尋找其活性物質(zhì)，采用正相硅膠、Sephadex LH-20和制備液相等多種色譜方法從楊梅樹皮醇提取物中分離得到14個(gè)化合物，并通過化合物的理化性質(zhì)和UV、IR、NMR、MS等波譜數(shù)據(jù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，其中二苯基庚烷類化合物4個(gè):3，5-二甲氧基-4-羥基楊梅醇，楊

4、梅醇，楊梅酮，Myricanol11-Sulfate;黃酮類化合物3個(gè):楊梅苷，槲皮素，槲皮苷;三萜及甾醇類化合物7個(gè):檉柳醇，熊果醇，熊果酸，蒲公英賽醇，楊梅萜二醇，β-谷甾醇，胡蘿卜苷。其中化合物3，5-二甲氧基-4-羥基楊梅醇為新化合物，化合物檉柳醇、熊果醇為首次從該屬植物中分離得到。
　　對(duì)6個(gè)主要化合物（楊梅醇、楊梅酮、Myricanol11-Sulfate、楊梅苷、槲皮素、槲皮苷）進(jìn)行抗氧化應(yīng)激活性篩選，分別采用H2O

5、2和谷氨酸誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型進(jìn)行活性篩選，結(jié)果表明3個(gè)黃酮類化合物對(duì)兩個(gè)模型均具有良好的細(xì)胞保護(hù)活性，以楊梅苷活性最強(qiáng);而3個(gè)二苯基庚烷，只有化合物Myricanol11-Sulfate因11位被磺酸基取代，具有較好的保護(hù)活性。流式細(xì)胞檢測(cè)進(jìn)一步證明化合物楊梅苷和Myricanol11-Sulfate可部分逆轉(zhuǎn)谷氨酸損傷導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡;氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果同樣證明楊梅苷和Myricanol11-Sulfate能夠有

6、效地抑制ROS的增多和MDA的形成同時(shí)增加細(xì)胞內(nèi)SOD的含量。
　　為了進(jìn)一步闡明楊梅樹皮、葉和果三個(gè)部位抗氧化活性的物質(zhì)基礎(chǔ)，采用UPLC-PDA、UPLC/QTof-MS結(jié)合主成分分析對(duì)三者的化學(xué)成分進(jìn)行比較研究，結(jié)果表明樹皮和葉中主要含有黃酮和二苯基庚烷類成分，果中主要含有黃酮和酚酸類成分;主成分分析(principle component analysis，PCA)表明，楊梅樹皮與楊梅葉的化學(xué)組成相近，但楊梅果與二者化學(xué)成