動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中巨噬細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞分布的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂是引起急性心腦血管事件的主要原因，因此確定易損斑塊對(duì)于預(yù)防急性心腦血管事件的發(fā)生具有重要意義。隨著各種醫(yī)學(xué)影像學(xué)技術(shù)的發(fā)展，使用非侵入性影像學(xué)方法診斷動(dòng)脈粥樣硬化斑塊已經(jīng)實(shí)現(xiàn)，然而，如何早期預(yù)測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化患者發(fā)生急性心腦血管事件成為目前需要解決的問題。動(dòng)脈粥樣硬化分子影像學(xué)研究的開展，是目前心腦血管疾病防治的重要研究內(nèi)容。本實(shí)驗(yàn)擬通過高脂飼養(yǎng)結(jié)合頸總動(dòng)脈外置套管的方法建立ApoE-/-小鼠頸動(dòng)脈粥樣硬化模型，應(yīng)用7

2、.0T MRI對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊進(jìn)行評(píng)價(jià)，并通過病理學(xué)方法檢測(cè)粥樣硬化斑塊中巨噬細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞的分布，為進(jìn)一步開展分子影像學(xué)研究奠定一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)分為以下三個(gè)部分:
　　第一部分ApoE-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成特點(diǎn)及磁共振成像的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:建立載脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠頸動(dòng)脈粥樣硬化模型，并應(yīng)用7.0T MRI對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　材料與方法:通過高脂飼養(yǎng)以及在左側(cè)

3、頸總動(dòng)脈外置套管的方法建立實(shí)驗(yàn)組ApoE-/-小鼠和對(duì)照組野生型C57小鼠頸動(dòng)脈粥樣硬化模型(n=6)，8周后對(duì)兩組小鼠行MR掃描。掃描完成后取血測(cè)定血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)，并取損傷側(cè)頸動(dòng)脈行HE染色觀察病理學(xué)變化，并對(duì)有斑塊形成的血管行Oil Red O染色觀察斑塊內(nèi)脂質(zhì)成分的分布。
　　結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組小鼠在建模8周后MRI表現(xiàn)為損傷側(cè)血管壁信號(hào)增高、管腔不規(guī)則狹窄，

4、相應(yīng)的組織病理學(xué)檢查顯示損傷側(cè)動(dòng)脈管腔狹窄，其內(nèi)可見粥樣斑塊形成;而對(duì)照組小鼠在建模8周后MRI表現(xiàn)僅見2例血管壁信號(hào)增高、管腔狹窄，相應(yīng)的組織病理學(xué)檢查顯示損傷側(cè)動(dòng)脈管壁增厚，未見粥樣斑塊形成。實(shí)驗(yàn)組小鼠血清TC和LDL值明顯升高（t值分別為9.99和9.12，P值均＜0.01），TG和HDL值無明顯變化（t值分別為-1.71和-1.05，P值＞0.05）。
　　結(jié)論:高脂飼養(yǎng)結(jié)合頸總動(dòng)脈外置套管的方法可以快速建立ApoE-/-

5、小鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型，應(yīng)用7.0T MRI可成功對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　第二部分 USPIO MR成像檢測(cè)ApoE-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:探討USPIO MR成像檢測(cè)ApoE-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的可行性，為早期發(fā)現(xiàn)粥樣硬化易損斑塊提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:通過高脂飼養(yǎng)以及在左側(cè)頸總動(dòng)脈外置套管的方法建立實(shí)驗(yàn)組ApoE-/-小鼠和對(duì)照組野生型C57小鼠頸動(dòng)脈粥樣硬化模型(n=6)，

6、8周后行頸部MRI平掃以及經(jīng)尾靜脈注入U(xiǎn)SPIO(0.25 mmolFe/kg)48 h后MRI掃描，掃描完成后取損傷側(cè)頸動(dòng)脈標(biāo)本行普魯士藍(lán)染色和CD68、α-SMA免疫熒光染色。
　　結(jié)果:ApoE-/-小鼠尾靜脈注入U(xiǎn)SPIO48 h后，在T2WI上損傷側(cè)頸動(dòng)脈血管腔內(nèi)斑塊信號(hào)較注射前減低，注射前后相對(duì)信號(hào)強(qiáng)度分別為1.00±0.24和0.73±0.21，信號(hào)強(qiáng)度減低(28.01±9.20)％，t=7.78，P值＜0.01，差

7、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，病理組織學(xué)檢測(cè)顯示斑塊內(nèi)有鐵顆粒沉積，且與斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞分布基本一致。C57小鼠注射前后相對(duì)信號(hào)強(qiáng)度分別為1.12±0.18和1.09±0.24，信號(hào)強(qiáng)度減低(-6.58±23.19)％，t=0.71，P值＞0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，病理組織學(xué)檢測(cè)顯示僅2例血管壁增厚，沒有鐵顆粒沉積。
　　結(jié)論:USPIO可作為MRI示蹤劑以巨噬細(xì)胞作為靶細(xì)胞在體檢測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊。
　　第三部分 ApoE-/-小鼠頸動(dòng)

8、脈粥樣硬化斑塊中巨噬細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞分布的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:檢測(cè)巨噬細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞在ApoE-/-小鼠頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成過程中分布的動(dòng)態(tài)變化。
　　材料和方法:12只雄性ApoE-/-小鼠，隨機(jī)分為3組，每組4只，通過高脂飼養(yǎng)以及在左側(cè)頸總動(dòng)脈外置套管的方法建立頸動(dòng)脈粥樣硬化模型，分別于建模后2周、4周和6周時(shí)處死動(dòng)物，取損傷側(cè)頸動(dòng)脈，采用免疫組織化學(xué)方法觀察斑塊中巨噬細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞分布的動(dòng)態(tài)變化。