銀杏葉提取物和L-NAME對(duì)內(nèi)毒素致大鼠肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：探討銀杏葉提取物復(fù)合硝基左旋精氨酸甲酯是否對(duì)內(nèi)毒素即脂多糖導(dǎo)致的大鼠肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷具有協(xié)同的保護(hù)作用。旨在指導(dǎo)臨床用藥，為臨床上提供一種治療由內(nèi)毒素導(dǎo)致的肺損傷的有效的方法。 材料與方法： 1.大鼠肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的原代培養(yǎng):利用大鼠肺動(dòng)脈組織塊貼壁法進(jìn)行肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)。 2.大鼠肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的鑒定 (1)倒置顯微鏡下形態(tài)觀察單個(gè)細(xì)胞呈多角形、梭形，融合成片的細(xì)胞呈鵝卵石樣，漩渦狀

2、排列。 (2)免疫熒光染色PAECs呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光，陰性對(duì)照組未出現(xiàn)上述表現(xiàn)。 3.試驗(yàn)分組:將4-6代細(xì)胞胰酶消化，細(xì)胞計(jì)數(shù)。以1×106細(xì)胞數(shù)接種于六孔板上共33孔，隨機(jī)分成五組即空白對(duì)照組、LPS損傷組、硝基左旋精氨酸甲酯組，三個(gè)治療水平(0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.4mmol/L)銀杏葉提取物組，三個(gè)治療水平(10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)、硝基左旋精氨酸甲酯+銀杏葉提取

3、物組，三個(gè)治療水平(0.1mmol/L+10μg/ml、0.2mmol/L+50μg/ml、0.4mmol/L+100μg/ml)，每組及各水平間設(shè)三個(gè)復(fù)孔，除空白對(duì)照組外其余各組均加入內(nèi)毒素即脂多糖1μg/ml。脂多糖、銀杏葉提取物、硝基左旋精氨酸甲酯與細(xì)胞共育24小時(shí)后檢測(cè)指標(biāo)。 4.各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè):流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞中的硝基酪氨酸水平以反映過(guò)氧亞硝基陰離子的含量。南京建成試劑盒檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中的乳酸脫氧酶、丙二醛、超

4、氧化物歧化酶、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞上清中的內(nèi)皮素-1、白細(xì)胞介素-8。 結(jié)果：GbE+L-NAME組與相同藥物濃度水平的GbE組和L-NAME相比較MDA、LDH均有明顯的降低；SOD與兩單獨(dú)用藥組比較明顯升高，GbE+L-NAME組中三個(gè)藥物濃度水平ET-1的濃度分別為(405.89±18.57)pg/ml、(395.92±14.67)pg/ml、(253.34±11.62)pg/ml與相同藥物濃度水平GbE組(324.5

5、3±19.77)pg/ml、(217.39±15.32)pg/ml、(166.92±18.74)pg/ml相比有所升高，與相同藥物濃度水平L-NAME組(467.8±17.94)pg/ml、(505.88±20)pg/ml相比顯著降低，GbE+L-NAME組中三個(gè)藥物濃度水平的NT％分別為(28.36±1.47)％、(16.94±1.13)％、(13.51±1.16)％比相同藥物濃度水平GbE組(36.97±1.86)％、(23.44±

6、1.4)％、(20.65±1.42)％和L-NAME組的(39.26±2.03)％、(33.7±1.94)％、(28.88±1.73)％顯著降低。 結(jié)論： 1.脂多糖能夠造成大鼠肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷，這種損傷主要是由于氧化反應(yīng)引起。 2.銀杏葉提取物和硝基左旋精氨酸甲酯均能夠減輕脂多糖導(dǎo)致的大鼠肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷，但是硝基左旋精氨酸甲酯升高細(xì)胞培養(yǎng)上清中的內(nèi)皮素-1，單獨(dú)用藥能加劇肺動(dòng)脈高壓的發(fā)生與發(fā)展，銀杏葉提取