PYK-2在PGE-,2-誘導(dǎo)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移中的作用研究.pdf

1、目的: 1.研究PGE2及其受體對結(jié)腸癌SW480細(xì)胞黏附、遷移及侵襲能力的影響。 2.探討PYK-2蛋白在PGE2誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移信號通路中可能的作用機(jī)制。 方法： 1.采用常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)方法培養(yǎng)結(jié)腸癌細(xì)胞株SW480。 2.RT-PCR檢測SW480中PGE2四種EP(EP1，EP2，EP3，EP4)受體的表達(dá)及PGE2對各EP受體表達(dá)情況的影響。 3.MTT法測定SW480細(xì)胞黏

2、附能力。 4.Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測SW480細(xì)胞遷移能力，Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測SW480細(xì)胞侵襲能力。 5.Western blotting檢測PGE2對SW480細(xì)胞中PYK-2蛋白磷酸化水平的影響。 6.Western blotting檢測PGE2+SC19220(EP1抑制劑)組，PGE2+BAPTA-AM(胞內(nèi)Ca2+螯合劑)組與PGE2組相比，SW480細(xì)胞中PYK-2蛋白磷酸化水平

3、的變化。 結(jié)果: 1.SW480細(xì)胞中，EP1，EP2，EP4都有表達(dá)，EP3無表達(dá)。加入PGE2后，EP1表達(dá)增加(P＜0.05)，其他受體的表達(dá)均無顯著變化。 2.PGE2作用于細(xì)胞后，黏附細(xì)胞OD值由0.207±0.009增加至0.417±0.088，遷移細(xì)胞數(shù)由84.33±5.13增加至144.00±12.53，侵襲細(xì)胞數(shù)由42.67±3.05增加至86.00±7.00，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)

4、。提示外源性PGE2可以顯著增加SW480細(xì)胞黏附、遷移及侵襲細(xì)胞數(shù)量。 3.PGE2+SC19220組PGE2組相比，黏附細(xì)胞OD值由0.417±0.088下降至0.140±0.011，遷移細(xì)胞數(shù)由144.00±12.53下降至110.67±10.06，侵襲細(xì)胞數(shù)由86.00±7.00下降至59.67±5.69，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。提示PGE2的EP1受體拮抗劑SC19220可顯著減少PGE2所誘導(dǎo)的黏附、遷移

5、及侵襲細(xì)胞數(shù)量。 4.結(jié)腸癌SW480細(xì)胞中，可檢測到較弱的磷酸化PYK-2的表達(dá)，經(jīng)PGE2作用后，10min內(nèi)PYK-2磷酸化水平隨時(shí)間逐漸增加，30min檢測基本降至基礎(chǔ)水平。半定量分析各時(shí)間點(diǎn)磷酸化PYK-2相對水平，0min，5min，10min的PYK-2磷酸化水平之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，30min與0min檢測結(jié)果之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。 5.PGE2+SC19220組、PGE2+B