平貝母愈傷組織培養(yǎng)及其形態(tài)轉(zhuǎn)變過程中糖和酶代謝的研究.pdf

1、目前貝母鱗莖組織培養(yǎng)方面有了很大進(jìn)展，技術(shù)上取得了一系列研究成果，但對貝母愈傷組織生長的因素和發(fā)育時期的生理學(xué)的研究較少。本實驗以平貝母為供試材料，研究了影響組培平貝母愈傷組織生長的因素，及愈傷組織和鱗莖生長過程中生物堿含量的變化與其原種鱗莖的比較，為平貝母的快速繁殖并獲得含量高的生物堿提供理論依據(jù)；通過研究組培平貝母培養(yǎng)過程中培養(yǎng)體不同發(fā)育時期的生理生化指標(biāo)，可為進(jìn)一步深入研究貝母器官發(fā)生機(jī)理和以后的分子研究提供參考。
　　通過

2、研究影響平貝母組培愈傷組織增殖生長的外部因子，結(jié)果表明在MS和B5培養(yǎng)基中，愈傷組織生長良好，以MS培養(yǎng)基效果最佳，White和N6培養(yǎng)基不適合平貝母愈傷組織的培養(yǎng)；當(dāng)MS培養(yǎng)基中附加NAA4.0 mg/L和NAA（或2,4-D）2.0 mg/L＋BA0.5 mg/L時，有利于愈傷組織增殖生長；光對愈傷組織生長也有影響，在光暗交替培養(yǎng)條件下，愈傷組織增殖快，誘導(dǎo)的不定芽數(shù)多，在先暗培養(yǎng)14 d后光培養(yǎng)14 d的條件下，產(chǎn)生有利于愈傷組織

3、增殖的淡黃色粘性愈傷組織。在平貝母組培的培養(yǎng)過程中，不論是愈傷組織還是鱗莖的總生物堿含量隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加均呈上升趨勢，在28 d達(dá)最高分別為0.163％和0.172%，各時期的含量均比原種鱗莖高；而不同時期的組培鱗莖的總生物堿含量均比愈傷組織高，但二者在培養(yǎng)28 d時，差異不大。
　　組培平貝母培養(yǎng)體不同發(fā)育時期的培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)體內(nèi)可溶性總糖和還原糖含量按照發(fā)育階段呈先降低后升高的趨勢，到小鱗莖膨大時，可溶性糖和還原糖的含量均

4、達(dá)到最高分別為53.41 mg/g和9.23 mg/g，還原糖含量與可溶性糖含量變化趨勢較一致。
　　在發(fā)育過程中各培養(yǎng)體的過氧化物酶同工酶在形成小鱗莖后酶帶就比較穩(wěn)定，且酶帶數(shù)最多，達(dá)到8條，愈傷組織在Rf=0.275處出現(xiàn)了顏色較淺且細(xì)的特異性帶，而其它時期的培養(yǎng)體則沒有此帶，其活性也在剛形成小鱗莖時達(dá)最高。過氧化氫酶在愈傷組織、胚狀體和剛形成小鱗莖時的三個時期都有表達(dá)，且酶譜僅有1條帶，相對遷移率為0.042，而在鱗莖膨大時

5、沒有該酶的表達(dá)。在整個發(fā)育過程中，酯酶同工酶的酶帶較豐富，共檢測出11條酶帶，且形成小鱗莖后酶譜的酶帶數(shù)都明顯多于愈傷組織和胚狀體時期，且愈傷組織在Rf=0.708處產(chǎn)生了特異性酶帶。淀粉酶同工酶在Rf=0.167處產(chǎn)生了平貝母α-淀粉酶的特征性酶帶，在Rf=0.250時，四個時期都有淺藍(lán)色的R-淀粉酶的表達(dá)；而β-淀粉酶酶帶在鱗莖膨大階段進(jìn)行表達(dá)，而在其它的三個時期沒有該酶的表達(dá)。在淀粉酶活力方面，培養(yǎng)體內(nèi)總淀粉酶活力整體呈下降-上升