Graves病患者外周血SLAM-SAP的變化及其對CD4+CXCR5+T細胞的影響.pdf

1、目的:通過檢測Graves病(Graves'disease，GD)患者外周血CD4+CXCR5+T細胞中信號轉(zhuǎn)導淋巴細胞激活分子(Signalinglymphocytic activation molecule，SLAM)和SLAM-相關(guān)蛋白(SLAM-associated protein，SAP)以及CD19+B細胞中SLAM的表達水平，研究SLAM/SAP對CD4+CXCR5+T細胞的影響，初步探討SLAM/SAP在GD致病機制中的

2、作用。
　　方法:
　　1.免疫磁珠法分選GD組與健康對照(HC)組外周血CD4+T細胞，采用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測外周血CD4+T細胞中SLAM和SAP的mRNA表達情況。
　　2.采用流式細胞術(shù)分別檢測GD組與HC組外周血CD4+T細胞和CD4+CXCR5+T細胞中SLAM、SAP分子的表達以及外周血CD19+B細胞中SLAM分子的表達。
　　3.免疫磁珠法分選健康人外周血CD4+T細胞與CD4+CXCR

3、5+T細胞，在抗CD3單抗存在的條件下，用抗SLAM單抗分別刺激這兩群細胞，同時用抗SLAM單抗的同型免疫球蛋白作為陰性對照。48小時后分別檢測CD4+CXCR5+T細胞中IFN-γ+、IL-4+、IL-17+及Foxp3+細胞比例以及CD4+T細胞中Foxp3+細胞的比例。
　　4.采用流式細胞術(shù)分別檢測GD組與HC組外周血CD4+CXCR5+Foxp3+T細胞（Tfr細胞）的比例，并分析GD患者外周血Tfr細胞比例與CD4+C

4、XCR5+T細胞中SAP表達量的相關(guān)性。
　　5.通過化學發(fā)光免疫分析法(chemiluminescence immunoassay, CIA)檢測GD患者血漿抗甲狀腺球蛋白抗體(anti-thyroglobulin antibody,TG-Ab)、抗甲狀腺過氧化物酶抗體(anti-thyroperoxidase antibody,TPO-Ab)和抗促甲狀腺激素受體抗體(anti-TSH receptor antibody,TR-

5、Ab)的水平,分別分析這三種抗體水平與GD患者外周血Tfr細胞比例的相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　1.HC組外周血CD4+T細胞中SLAM mRNA水平相對表達量為1.8950±0.2700，GD組為3.1960±0.5280，GD組SLAM mRNA表達明顯增加(P=0.0450)。HC組外周血CD4+T細胞中SAP mRNA水平相對表達量為0.2570±0.0551，GD組為0.4725±0.0754，GD組SAPmRNA表

6、達明顯增加(P=0.0326)。
　　2.HC組外周血CD4+T細胞中SLAM平均熒光強度為38.8700±3.3720，GD組為34.6300±2.2350，兩組相比無明顯差異(P=0.2894);HC組外周血CD4+CXCR5+T細胞中SLAM平均熒光強度為54.3500±3.2500，GD組為52.7700±3.2470，兩組相比無統(tǒng)計學差異(P=0.7358);HC組CD19+B細胞中SLAM平均熒光強度為53.4200±

7、4.5560，GD組為67.8600±4.7680，GD組CD19+B細胞中SLAM表達明顯增加(P=0.0377)。
　　HC組外周血CD4+T細胞中SAP平均熒光強度為35.6500±2.6460，GD組為42.9900±2.444，GD組CD4+T細胞中SAP表達明顯增加(P=0.0498);HC組外周血CD4+CXCR5+T細胞中SAP平均熒光強度為45.5700±2.8970，GD組為55.360±3.0220，GD組C

8、D4+CXCR5+T細胞中SAP表達明顯增加(P=0.0271)。
　　3.在抗CD3單抗的存在下，用抗SLAM單抗體外刺激健康人CD4+T細胞和CD4+CXCR5+T細胞48小時后，發(fā)現(xiàn)陰性對照組CD4+CXCR5+T細胞中Foxp3+細胞比例為7.8900±0.7351％，抗SLAM單抗刺激組為3.6700±0.7512％，抗SLAM單抗刺激組Tfr細胞比例顯著降低(P=0.0159)，而兩組IFN-γ+、IL-4+以及IL-

9、17+細胞比例無明顯差異;CD4+T細胞中Foxp3+細胞比例也無明顯變化。
　　4.HC組外周血Tfr細胞比例為7.0550±0.5550％，GD組為5.2720±0.5241％，GD組Tfr細胞比例降低(P=0.0257)，并與CD4+CXCR5+T細胞中SAP的表達量呈負相關(guān)(r=-0.5010，p=0.0342)。
　　5.GD組外周血Tfr細胞比例分別與血漿TR-Ab、TPO-Ab和TG-Ab水平呈明顯負相關(guān)（r=