慢性阻塞性肺疾病患者外周血T細(xì)胞表達(dá)CXCR3的研究.pdf

1、背景
　　 慢性阻塞性肺疾病(COPD)由于其患病人數(shù)多,死亡率高,社會(huì)負(fù)擔(dān)重,已成為一個(gè)重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題。目前,COPD 居全球死亡因?yàn)榈牡?位,在未來(lái)的幾十年,其發(fā)病率和死亡率將會(huì)進(jìn)一步上升。COPD發(fā)病的分子和細(xì)胞學(xué)機(jī)制尚未完全明了。參與COPD的炎癥細(xì)胞主要有中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞以及淋巴細(xì)胞,淋巴細(xì)胞在COPD發(fā)病過(guò)程中如何發(fā)揮作用目前還不完全清楚。趨化因子是一類廣泛參與炎癥反應(yīng)的小分子蛋白,通過(guò)與趨化因子受體結(jié)合,誘

2、導(dǎo)淋巴細(xì)胞定向遷移至特定部位,并產(chǎn)生局部免疫應(yīng)答,這可能是造成炎癥反應(yīng)的一個(gè)重要因素。趨化因子受體3(CXCR3)主要存在于T淋巴細(xì)胞表面,在T淋巴細(xì)胞向炎癥部位募集過(guò)程中可能起重要作用,對(duì)于該問(wèn)題的探討,將有助于闡明淋巴細(xì)胞在COPD發(fā)病中的作用機(jī)制,為尋找新的治療靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。
　　 目的
　　 一.探討外周血 T 細(xì)胞 CXCR3的表達(dá)在 COPD 發(fā)病過(guò)程中所起的作用。
　　 二.了解 T 細(xì)胞 CX

3、CR3 表達(dá)的影響因素,如常用的治療COPD的藥物氨茶堿、糖皮質(zhì)激素對(duì)其的影響。
　　 方法
　　 一.將研究對(duì)象分為正常對(duì)照組(n=14)、COPD 急性加重組(n=20)、COPD穩(wěn)定組(n=17)。急性加重期患者在入院初即采靜脈血1次。經(jīng)住院治療,待患者咳嗽、咳痰、氣短等癥狀明顯緩解后,再次采靜脈血 1 次。穩(wěn)定期患者及對(duì)照組就診時(shí)采靜脈血 1 次。分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs),標(biāo)記抗體,流式細(xì)胞儀檢測(cè)三組患

4、者 T 細(xì)胞表面 CXCR3的表達(dá)。
　　 二.入選2個(gè)月內(nèi)未使用氨茶堿和激素的COPD 穩(wěn)定期患者(n=12),分離PBMCs,分空白對(duì)照組、氨茶堿組(1.6μg/ml、16μg/ml)以及布地奈德組(3個(gè)濃度梯度0.1nmol/l、10nmol/l、1000nmol/l),37℃ CO2 培養(yǎng)箱孵育72小時(shí),流式細(xì)胞儀檢測(cè)T細(xì)胞表面CXCR3的表達(dá)。
　　 結(jié)果
　　 一.COPD患者外周血T淋巴細(xì)胞表達(dá)CX

5、CR3的研究結(jié)果:(1)三組間及COPD 急性加重期組治療前后 CD4+、CD8+T 細(xì)胞分別占總T細(xì)胞的百分比,CD4+/CD8+的比值,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P>0.05。(2)CD8+CXCR3+T 細(xì)胞占總CD8+T 細(xì)胞的百分比及 CD4+CXCR3+T 細(xì)胞占總 CD4+T 細(xì)胞百分比:COPD 急性加重期組較 COPD 穩(wěn)定組及對(duì)照組明顯降低,COPD 穩(wěn)定組較對(duì)照組明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.05。CD4+CXCR3

6、+和CD8+CXCR3+T 細(xì)胞上 CXCR3的平均熒光強(qiáng)度(mean fluorescent intensity,MFI)三組間無(wú)明顯差異。(3)COPD急性加重期組經(jīng)治療后 CD8+CXCR3+T 細(xì)胞占總 CD8+T 細(xì)胞的百分比及CD4+CXCR3+T 細(xì)胞占總 CD4+T 細(xì)胞百分比,CD4+CXCR3+和CD8+CXCR3+T細(xì)胞上 CXCR3的MFI,均明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.05。(4)相關(guān)性分析:COPD

7、急性加重期治療前和穩(wěn)定期患者 FEV1％預(yù)計(jì)值與 CD4+、CD8+T細(xì)胞上 CXCR3的表達(dá)均無(wú)相關(guān)性,P>0.05。
　　 二.氨茶堿及布地奈德對(duì)COPD患者T淋巴細(xì)胞表達(dá)CXCR3的影響研究:
　　 (1)氨茶堿組:CD8+CXCR3+T細(xì)胞占總CD8+T細(xì)胞的百分比:1.6μg/ml氨茶堿組、16μg/ml氨茶堿組與空白對(duì)照組比較有下降趨勢(shì),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P>0.05；氨茶堿組間兩兩比較差異也無(wú)顯著性,P>

8、0.05。CD8+CXCR3+T細(xì)胞上CXCR3的MFI:1.6μg/ml氨茶堿組、16μg/ml氨茶堿組與空白對(duì)照組比較均下降,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.05。CD4+CXCR3+T細(xì)胞占總CD4+T細(xì)胞百分比以及CD4+CXCR3+T細(xì)胞上CXCR3的MFI:三組問(wèn)差異無(wú)顯著性,P>0.05。(2)布地奈德組:CD8+CXCR3+T細(xì)胞占總CD8+T細(xì)胞的百分比:0.1nmol/l、10nmol/l、1000nmol/l布地奈德

9、組均顯著低于空白對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P>0.05；隨著藥物濃度的升高,CD8+CXCR3+T細(xì)胞占總CD8+T細(xì)胞的百分比逐漸下降,1000nmol/l布地奈德組較0.1nmol/l布地奈德組顯著降低,差異具有顯著性,P<0.05。CD8+CXCR3+T細(xì)胞上CXCR3的MFI:0.1nmol/l、10nmol/l、1000nmol/l布地奈德組均較空白對(duì)照組下降,差異有顯著性,P<0.05；布地奈德各組間差異無(wú)顯著性,P>0.

10、05。CD4+CXCR3+T細(xì)胞占總 CD4+T細(xì)胞百分比:0.1nmol/l、10nmol/l、1000nmol/l布地奈德組與空白對(duì)照組比較呈下降趨勢(shì),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P>0.05。CD4+CXCR3+T細(xì)胞上CXCR3的MFI:10nmol/l、1000nmol/l布地奈德組較空白對(duì)照組下降,差異有顯著性,P<0.05。
　　 結(jié)論
　　 一.COPD 急性加重期、穩(wěn)定期患者外周血 CD4+、CD8+T 占總T細(xì)胞