NGI重組DNA疫苗對轉(zhuǎn)基因AD小鼠的治療作用.pdf

1、阿爾茨海默病(AD)是一種以進(jìn)行性癡呆為主要臨床表現(xiàn)的神經(jīng)退行性疾病，表現(xiàn)為記憶、智力、判斷能力、情感障礙和行為失常甚至發(fā)生意識模糊等，其顯著的病理學(xué)特征是腦內(nèi)出現(xiàn)老年斑、神經(jīng)元纖維纏結(jié)、和神經(jīng)元和突觸丟失。β淀粉樣蛋白(Aβ)是引起AD發(fā)病最主要的因素，是導(dǎo)致AD特異性病理老年斑形成的主要原因，來源于淀粉樣前體蛋白(APP)經(jīng)β分泌酶再經(jīng)γ分泌酶進(jìn)一步酶切形成的長度不等的片段。APP成分肽的釋放包括Aβ沉積主要發(fā)生在突觸，而新加坡分子

2、細(xì)胞生物學(xué)研究院發(fā)現(xiàn)APP只在中樞神經(jīng)系統(tǒng)郎飛氏結(jié)簇集，在外周神經(jīng)呈均勻分布，并提出了AD的郎飛氏結(jié)Aβ假說，認(rèn)為郎飛氏結(jié)是Aβ的重要釋放位點。位于郎飛氏結(jié)區(qū)的Tenascins—R，少突膠質(zhì)細(xì)胞髓鞘糖蛋白(OMgp)和位于結(jié)旁區(qū)的Nogo—A是與郎飛氏結(jié)相關(guān)的軸突生長抑制因子(NGIs)，而郎飛氏結(jié)是一群細(xì)胞粘附分子，細(xì)胞外基質(zhì)分子和電壓門控鈉離子通道特異性簇集的軸突區(qū)域，結(jié)分子相互作用。OMgp與Na+通道相互作用，參與軸突生長抑制

3、，細(xì)胞增生調(diào)節(jié)，其LRR結(jié)構(gòu)域是其神經(jīng)生長抑制功能的主要功能區(qū)。Tenascin—R通過EGF—L結(jié)構(gòu)域與Na+通道β亞基相互作用參與調(diào)節(jié)Na+通道，增強(qiáng)Na+通道的電流。Nogo—A其特異性氨基端(Nogo—N)，66個氨基酸細(xì)胞外域(Nogo—66)是其主要的抑制性結(jié)構(gòu)域，介導(dǎo)軸突生長抑制和生長堆塌陷的作用。TAG1與APP相互作用以γ分泌酶依賴的方式促進(jìn)APP細(xì)胞內(nèi)域(AICD)的釋放。在郎飛氏結(jié)，APP與鈉離子通道形成復(fù)合體，相

4、互作用正向調(diào)節(jié)Na+內(nèi)流。我們預(yù)測這些結(jié)分子與APP組成一個大的蛋白復(fù)合體，相互作用調(diào)節(jié)APP的功能，影響AICD的釋放和Aβ的產(chǎn)生。為了探索NGI對AD的治療作用，構(gòu)建包含小鼠OMgp細(xì)胞外8 LRP重復(fù)序列，人Tenascin—R的EGF—L結(jié)構(gòu)域，以及人Nogo—A的氨基端和66個氨基酸細(xì)胞外域cDNA的重組DNA疫苗；疫苗組APPswe/PS1dE9轉(zhuǎn)基因AD小鼠肌肉注射NGI重組DNA疫苗，空載體組(注射pcDNA4)和空白對

5、照組(不作任何處理)為對照組。Morris水迷宮檢測其行為學(xué)差別，結(jié)果顯示：4.5月齡轉(zhuǎn)基因小鼠在隱蔽平臺實驗中，訓(xùn)練兩天后疫苗組小鼠潛伏期比對照組縮短30％(P<0.05)。探索實驗顯示3月齡疫苗組比空載體組和空白對照組小鼠穿越目標(biāo)象限的次數(shù)分別增加48％和44％(P<0.05)。免疫組化結(jié)果顯示疫苗組小鼠大腦皮質(zhì)和海馬內(nèi)老年斑的面積百分比及海馬內(nèi)老年斑的數(shù)量比對照組均高50％。主要臟器HE染色未見明顯病理毒性。以上結(jié)果表明NGI重組