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1、目的變性高效液相色譜(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)技術(shù)是近年來發(fā)展起來的一項新技術(shù).該研究通過應(yīng)用該技術(shù)檢測胃癌組織、血漿及腹腔沖洗液中相關(guān)基因突變,探討了其在檢測實體腫瘤體細胞突變中的一些應(yīng)用特點,闡明所檢測的相關(guān)基因在胃癌中表達的意義,擬建立一種快速、方便、準確地篩查胃癌組織、血漿及腹腔沖洗液中基因突變的新方法.結(jié)論1首次應(yīng)用DHPLC檢測胃癌組織中
2、體細胞基因突變,并證實胃癌組織中非腫瘤細胞可以提供足量的野生型DNA,因此在檢測胃癌組織突變時,可不加入野生型DNA而直接檢測.選用DHPLC檢測溫度時,兩種選擇方法各有優(yōu)點.但在檢測樣本量較大時,以選用檢測溫度數(shù)較少的方法2(應(yīng)用DHPLC儀隨機攜帶的Wavemaker4.1融解曲線,結(jié)合操作者使用經(jīng)驗判斷及摸索確定檢測溫度)較為適宜,且選用的相鄰溫度溫差不大于2℃時,均不會造成漏檢.只要注意調(diào)整B液濃度梯度,避免雜質(zhì)峰的干擾,及注意
3、與相應(yīng)正常對照平行檢測,普通Taq酶可以用于DHPLC的檢測,并可獲得較好的效果.2首次應(yīng)用DHPLC檢測胃癌組織中p53基因突變,該組中p53基因突變率與既往報道相似.在腸型胃癌中突變率明顯高于彌漫型胃癌.發(fā)現(xiàn)既往未見報道的p53基因突變3例.首次在胃癌中檢測CHK2基因和ST7基因突變.該組中未發(fā)現(xiàn)CHK2基因突變說明其2個突變熱點在胃癌的發(fā)生發(fā)展中可能不起主要作用.該組中未發(fā)現(xiàn)ST7基因突變,可能提示在7q31區(qū)域可能另有其它抑癌
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