細(xì)胞粘附調(diào)節(jié)基因CARmRNA在肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)及苦參堿體外誘導(dǎo)肝癌分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文細(xì)胞粘附調(diào)節(jié)基因CARmRNA在肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)及苦參堿體外誘導(dǎo)肝癌分化的實(shí)驗(yàn)研究姓名：王涌申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：外科學(xué)（普外）指導(dǎo)教師：彭承宏20040501乇涌2004年漸趕天掌持_j研究生學(xué)靛論文掣‰gYongDissertationforPhD參照國外文獻(xiàn)，設(shè)計(jì)CAR及actin目l物各一對(duì)。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物片段分掰戈CAR318bp，一actin254bp。敬各樣本組RNA蠡霞瓶RTPCR擴(kuò)增，RT參數(shù)設(shè)

2、囂棱麓說秘書，PCR參數(shù)設(shè)置螽下：94℃頸交健2min；94℃交髖lmin，60℃遙火30s，72℃堿伸30s，CAR和Bwactin分管擴(kuò)增，CAR35循環(huán)。Baclin20循環(huán)；再72℃蛙終延攙iomiu，PCR產(chǎn)虢44C絳存。取10rtlPCR擴(kuò)增產(chǎn)物，以2粥瓊脂糖凝膠電泳，圖像掃描傈j字，用BandLeader(Vet3，00)電泳翻嫌分耩軟囂，辯電泳條帶靜斃密度遴囂分褥，以CAR／一actin鮑光密度比值作為相對(duì)定懿，表示CA

3、RmRNA的表達(dá)強(qiáng)度。結(jié)暴對(duì)總RNA用紫外分光光發(fā)計(jì)進(jìn)行檢測，A260／A280I8，證明掇墩的總RNA純菠較意，箢蛋鑫質(zhì)污染。經(jīng)15％串醛交往凝膠魄溶檢溺可見清糍酌18SrRNA蘩l28SrRNA兩條帶。表嘲RNA臻擒競整，無裴顯酶解。PCR擴(kuò)增產(chǎn)耪電泳顯示，4種細(xì)藏祿鰳檢涮翻CARmRNA寢逮。在3I8bp和254bp位讖分別可見CAR和13actin清晰條帶。經(jīng)BandLeader較釋分據(jù)，綏榮顯示正常纛A(yù)掰綴藏系L02CARmR