Egr-1啟動(dòng)子調(diào)控的hNIS基因轉(zhuǎn)染介導(dǎo)宮頸癌放射性核素顯像和治療研究.pdf

1、目的：
　　 構(gòu)建含早期生長(zhǎng)反應(yīng)基因-1(Egr-1)啟動(dòng)子調(diào)控的人鈉碘轉(zhuǎn)運(yùn)體(hNIS)基因重組質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)染至人宮頸癌Hela細(xì)胞中特異性表達(dá)。探討Egr-1啟動(dòng)子調(diào)控的hNIS基因介導(dǎo)宮頸癌放射性核素顯像和治療的可能性。
　　 方法：
　　 1.提取FL*-hNIS/pcDNA3質(zhì)粒，并以Egr-1/pMR18T為模板PCR擴(kuò)增Egr-1啟動(dòng)子序列，亞克隆至FL*-hNIS/pcDNA3質(zhì)粒，構(gòu)成重組質(zhì)粒Eg

2、r-1-hNIS/pcDNA3，酶切電泳鑒定。
　　 2.將Egr-1-hNIS/pcDNA3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至人宮頸癌Hela細(xì)胞中，G418篩選出細(xì)胞克隆，流式細(xì)胞儀篩選出hNIS表達(dá)率最高的細(xì)胞株Hela-Egr-1-hNIS。同法以FL*-hNIS/pcDNA3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染并篩選出的Hela-FL*-hNIS細(xì)胞株作為陽(yáng)性對(duì)照，未轉(zhuǎn)染的Hela細(xì)胞作為陰性對(duì)照，RT-PCR鑒定hNIs基因的表達(dá)。
　　 3.碘攝取實(shí)驗(yàn)、Na

3、ClO4抑制實(shí)驗(yàn)及碘流出實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)細(xì)胞體外攝碘功能，克隆形成實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)碘-131對(duì)細(xì)胞的體外治療效果;Hela-Egr-1-hNIS細(xì)胞另外給予不同劑量的X線輻照后再行碘攝取實(shí)驗(yàn)及碘流出實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)Egr-1啟動(dòng)子對(duì)hNIS蛋白功能的輻射誘導(dǎo)作用。
　　 4.建立Hela-FL*-hNIS細(xì)胞、Hela-Egr-1-hNIS細(xì)胞及Hela細(xì)胞荷瘤裸鼠模型。用Na125I進(jìn)行體內(nèi)分布，計(jì)算不同時(shí)間點(diǎn)移植瘤及各主要臟器組織的％ID/g和瘤

4、體/非瘤體組織放射性計(jì)數(shù)比值(T/NT);進(jìn)行Na131I及99mTcO4-顯像，觀察比較移植瘤的顯像情況，分析瘤體與對(duì)側(cè)相應(yīng)部位正常軟組織的比值(T/B)。
　　 結(jié)果：
　　 1.本研究成功擴(kuò)增出Egr-1啟動(dòng)子，并成功構(gòu)建出重組質(zhì)粒Egr-1-hNIS/pcDNA3，經(jīng)酶切電泳鑒定正確。
　　 2.Egr-1-hNIS/pcDNA3和FL*-hNIS/pcDNA3質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染入Hela細(xì)胞中，流式細(xì)胞儀分別

5、篩選出hNIS表達(dá)效率最高的穩(wěn)定細(xì)胞株，表達(dá)率分別為11.2%和10.14%。RT-PCR結(jié)果示Hela-Egr-1-hNIS組及陽(yáng)性對(duì)照組均有hNIS基因表達(dá)，陰性對(duì)照組無(wú)表達(dá)。
　　 3.碘攝取實(shí)驗(yàn)示Hela-Egr-1-hNIS細(xì)胞和Hela-FL*-hNIS細(xì)胞攝碘能力比陰性對(duì)照Hela細(xì)胞分別提高了13倍和21倍，且攝碘能力均能被NaClO4抑制。Hela-Egr-1-hNIS細(xì)胞輻照后的攝碘能力增加，大致呈劑量依賴性

6、；輻照后的碘流出無(wú)明顯變化。131I體外治療實(shí)驗(yàn)示Hela-Egr-1-hNIS、Hela-FL*-hNIS和Hela的克隆形成率分別為(50.49±9.75)%、(6.70±1.57)%和(86.32±6.56)%。
　　 4.Hela-Egr-1-hNIS細(xì)胞荷瘤裸鼠模型Na125I體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)示移植瘤可明顯聚集Na125I，1～12h期間腫瘤組織的%ID/g明顯高于除甲狀腺和胃以外的各組織臟器，T/NT值在3h時(shí)基本達(dá)到最

7、高值。Na131I顯像示移植瘤部位明顯濃聚放射性，T/B值在4h時(shí)最高，為4.05。99mTc04-顯像示移植瘤部位放射性持續(xù)濃聚至48h，T/B值在19h達(dá)最高值9.13。兩種顯像各時(shí)間點(diǎn)T/B值均高于陽(yáng)性對(duì)照組。
　　 結(jié)論：
　　 1.成功建立了Egr-1啟動(dòng)子調(diào)控的穩(wěn)定表達(dá)hNIS蛋白的Hela-Egr-1-hNIS細(xì)胞系，該細(xì)胞系具有較強(qiáng)的攝碘功能，且具有一定的輻射誘導(dǎo)作用。
　　 2.Hela-Egr