PTEN與P27在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)及其意義.pdf

1、背景和目的；膀胱癌是人類最常見惡性腫瘤之一，其中移行細(xì)胞癌(transitionalcellcarcinoma，TCC)約占90％以上。其發(fā)病率在逐年增高，嚴(yán)重危害人們的健康。但是，其發(fā)病的確切機(jī)制仍未完全闡明。近年來，隨著對腫瘤發(fā)生機(jī)制分子生物學(xué)方面的深入研究，人們認(rèn)識到癌基因的激活、抑癌基因的失活以及兩者之間的協(xié)同作用導(dǎo)致細(xì)胞增殖和凋亡異常，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。腫瘤被認(rèn)為是一種基因疾病。PTEN是第一個被發(fā)現(xiàn)具有磷酸酯酶活性的抑

2、癌基因，全稱是與細(xì)胞骨架蛋tensin同源在腫瘤第10號染色體丟失的磷酸酶基因，參與細(xì)胞增殖過程、轉(zhuǎn)化、粘附的負(fù)性調(diào)控。 隨著對細(xì)胞周期的研究取得的一些突破性進(jìn)展，對細(xì)胞周期與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展之間關(guān)系的認(rèn)識也不斷加深，細(xì)胞增殖的失控是腫瘤組織最顯著的特點(diǎn)。因此，腫瘤也是一類細(xì)胞周期疾病。P27是一個新近發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，它能與CDK結(jié)合并抑制其活性，進(jìn)而負(fù)性調(diào)控細(xì)胞周期進(jìn)程，阻滯細(xì)胞周期G1由向S期轉(zhuǎn)換。P27的功能引起了廣泛的關(guān)

3、注。 目前國內(nèi)對PTEN、P27在膀胱癌中表達(dá)的相關(guān)性研究報(bào)道不多，而同時對PTEN和P27在膀胱癌中表達(dá)的研究國內(nèi)尚未見報(bào)道，它們與膀胱癌發(fā)生、發(fā)展，浸潤轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系尚不十分清楚。為此，本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化鏈霉菌抗生物素蛋白—過氧化物酶染色法(S-P法)聯(lián)合檢測BTCC與正常組織中PTEN及P27的表達(dá)，探討其在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用，并分析兩者之間的內(nèi)在聯(lián)系，以期為研究膀胱癌發(fā)生、發(fā)展機(jī)理及臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

4、材料與方法；1.標(biāo)本來源收集鄭州大學(xué)一附院2004年7月至2005年8月間收治的膀胱移行細(xì)胞癌(BTCC)住院患者開放手術(shù)切除的膀胱腫瘤標(biāo)本62例。其中男48例，女14例；年齡34～78歲，平均年齡63.2歲；行膀胱部分切除55例，膀胱全切7例；腫瘤單發(fā)35例，多發(fā)27例；初發(fā)33例，復(fù)發(fā)29例。另收集23例正常膀胱組織標(biāo)本(取自膀胱結(jié)石及前列腺增生癥開放手術(shù)病人)作為對照。膀胱腫瘤標(biāo)本病理分級按WHO標(biāo)準(zhǔn)：G122例，G224例，G3

5、16例。臨床分期按UICC-TNM標(biāo)準(zhǔn)：Ta-Tl期37例，T2-T4期25例。 2.實(shí)驗(yàn)方法標(biāo)本用10％福爾馬林固定，石蠟包埋后4um連續(xù)切片。采用免疫組織化學(xué)法(S-P法)測定PTEN，P27蛋白的表達(dá)情況，操作按試劑說明書進(jìn)行。己知前列腺癌陽性片作為陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。 3.結(jié)果判定參照文獻(xiàn)資料，PTEN染色判斷標(biāo)準(zhǔn)：染色陽性以細(xì)胞漿內(nèi)有橘黃色或棕黃色顆粒者為標(biāo)準(zhǔn)，隨機(jī)選擇10個高倍鏡(×400)

6、視野，根據(jù)陽性細(xì)胞占同類細(xì)胞總數(shù)的百分率及細(xì)胞染色強(qiáng)度綜合判定。染色強(qiáng)度評分標(biāo)準(zhǔn)：不著色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分。比例評定標(biāo)準(zhǔn)：陽性細(xì)胞數(shù)＜10％為0分，10％-40％為1分，41％-70％為2分，＞70％為3分。兩種評分相加，0-2分為陰性；3-6分為陽性。P27染色判斷標(biāo)準(zhǔn)：以細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒作為陽性細(xì)胞。高倍鏡下隨機(jī)選擇10個高倍視野，計(jì)數(shù)1000個腫瘤細(xì)胞，根據(jù)陽性數(shù)所占的比例判斷結(jié)果：P27

7、陰性：陽性細(xì)胞數(shù)≤50％，染色強(qiáng)度較淺；P27陽性：陽性細(xì)胞數(shù)＞50％，染色強(qiáng)度中度以上。 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS13.0軟件行統(tǒng)計(jì)分析，χ2檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，相關(guān)性檢驗(yàn)采用Spearman等級相關(guān)檢驗(yàn)。以a=0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)顯著性水準(zhǔn)。 結(jié)果；1.PTEN蛋白在BTCC和正常膀胱粘膜的表達(dá)結(jié)果 ①.PTEN蛋白在正常膀胱粘膜和膀胱移行細(xì)胞癌組織中的陽性表達(dá)率分別為 100％、46.77％(29

8、/62)差異有顯著性(P＜0.05). ②.PTEN蛋白在G1，G2，G3中的陽性表達(dá)率依次為72.73％(16/22)，37.50％(9/24)，25.00％(4/16)，G1與G2或G3相比較，差異有顯著性(P＜0.05)；在Ta-T1中PTEN陽性表達(dá)率為64.86％(24/37)，明顯高于T2-T4中的陽性表達(dá)率20.00％(5/25)，兩者相比差異有顯著性(P＜0.05)。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，PTEN蛋白陽性表達(dá)率為18.

9、75％(3/16)低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽性表達(dá)率46％(26/46)，兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。PTEN的表達(dá)隨病理分級、臨床分期的增高而明顯下降。 2.P27蛋白在BTCC和正常膀胱粘膜的表達(dá)結(jié)果 ①.P27蛋白在正常膀胱粘膜和膀胱移行細(xì)胞癌組織中的陽性表達(dá)率分別為95.65％(22/23)，43.55％(27/62)，差異有顯著性(P＜0.05)。 ②.P27蛋白在G1，G2，G3中的陽性表達(dá)率依次

10、為72.7.％(16/22)，33.33％(8/24)，18.75％(3/16)，組間比較，差異有顯著性(P＜0.05)；在Ta-T1中，P27陽性表達(dá)率為62.16％(23/37)，明顯高于T2-T4中的陽性表達(dá)率16.00％(4/25)，兩者相比差異有顯著性(P＜0.05)。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，P27蛋白陽性表達(dá)率為12.50％(2/16)，顯著低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)率54.35％(25/46)，兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05

11、)。P27的表達(dá)隨病理分級、臨床分期的增高而明顯下降。 3.PTEN蛋白和P27蛋白表達(dá)缺失與膀胱移行細(xì)胞癌腫瘤的數(shù)目、患者性別、年齡等情況無明顯相關(guān)性，在初發(fā)瘤與復(fù)發(fā)瘤中的表達(dá)亦無顯著差異(P＞0.05)。4.PTEN與P27相關(guān)性分析顯示，二者的表達(dá)呈正相關(guān)。 結(jié)論；1.PTEN蛋白在正常組織中呈現(xiàn)為高表達(dá)，在膀胱移行細(xì)胞癌呈現(xiàn)低表達(dá)，與膀胱癌分化程度、臨床病理分期、浸潤及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。 2.P27蛋白在正常