基于腦能量代謝的通絡(luò)醒腦泡騰片治療阿爾茨海默病的代謝組學(xué)研究.pdf

1、目的：考察通絡(luò)醒腦泡騰片對海馬注射Aβ25-35大鼠腦能量代謝和學(xué)習(xí)記憶功能的影響,并采用代謝組學(xué)技術(shù)探索其對癡呆大鼠內(nèi)源性代謝標(biāo)志物的影響,與腦能量代謝相互驗(yàn)證,初步揭示其抗癡呆作用及其機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)方法：建立凝聚態(tài)Aβ25-35大鼠雙側(cè)海馬注射的大鼠癡呆模型,通絡(luò)醒腦泡騰片干預(yù)后,采用Morris水迷宮檢測大鼠定學(xué)習(xí)記憶功能的改變,常規(guī)病理學(xué)方法考察大鼠海馬的病理形態(tài)學(xué)的改變,揭示通絡(luò)醒腦泡騰片的“益智”作用；采用免疫組化法

2、檢測其對大鼠海馬丙酮酸脫氫酶(PDH)和α-酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)的表達(dá)的影響,揭示通絡(luò)醒腦泡騰片對癡呆大鼠模型腦能量代謝的影響；收集大鼠的尿液,使用UFLC-TOF-MS的技術(shù)進(jìn)行尿液代謝產(chǎn)物的測試,測定結(jié)果采用主成分分析法(PCA)和正交-偏最小二乘投影判別分析(O-RLSDA)等方法等進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,并通過載荷圖分析和數(shù)據(jù)庫檢索對比,確定內(nèi)源性特征標(biāo)志物,并分析比較不同組別特征標(biāo)志物豐度的差異,闡釋內(nèi)源性代謝標(biāo)志物的生物學(xué)意

3、義,并與腦能量代謝指標(biāo)進(jìn)行相互校驗(yàn)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　1.通絡(luò)醒腦泡騰片對癡呆模型大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響
　　訓(xùn)練第2天至第5天,模型對照組逃避潛伏期較假手術(shù)組顯著延長,有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),通絡(luò)醒腦泡騰片高、中、低劑量組與模型對照組比較,逃避潛伏’期在不同時間點(diǎn)均顯著縮短,有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；空間探索測試結(jié)果表明,模型對照組第一象限時間、經(jīng)過平臺次數(shù)和平臺停留時間均較假手術(shù)組顯著縮短

4、或減少(P<0.05),通絡(luò)醒腦泡騰片各劑量組與模型對照組比較,第一象限時間和平臺停留時間顯著延長,經(jīng)過平臺次數(shù)顯著增多,具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　2.通絡(luò)醒腦泡騰片對癡呆大鼠模型腦部病理形態(tài)的影響
　　與假手術(shù)組比較，模型對照組大鼠神經(jīng)細(xì)胞明顯減少，海馬區(qū)細(xì)胞排列紊亂，膠質(zhì)細(xì)胞增生明顯，神經(jīng)元凋亡現(xiàn)象明顯，可見不同數(shù)量的脂褐素顆粒沉積；通絡(luò)醒腦泡騰片各組大鼠與模型對照組比較，腦灰質(zhì)、白質(zhì)區(qū)組織結(jié)構(gòu)趨于正常

5、，可見退變的神經(jīng)元嗜堿性深染不規(guī)則梭形結(jié)構(gòu)，腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)量減少，海馬區(qū)細(xì)胞排列紊亂顯著改善，膠質(zhì)細(xì)胞增生和海馬CA1區(qū)水腫情況顯著減輕。
　　3.通絡(luò)醒腦泡騰片對AD大鼠模型α-KGDH和PDH表達(dá)的影響
　　與假手術(shù)組比較，模型對照組α-KGDH和PDH陽性免疫反應(yīng)產(chǎn)物的顯著低表達(dá)，平均光密度值顯著降低（P<0.05）；通絡(luò)醒腦泡騰片高劑量組和中劑量組較模型對照組α-KGDH和PDH陽性免疫反應(yīng)產(chǎn)物的表達(dá)顯著增強(qiáng)，平均

6、光密度值顯著增高，有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　4.通絡(luò)醒腦泡騰片對AD大鼠模型代謝組學(xué)的影響
　　PLS-DA得分圖結(jié)果顯示，各組分離較為明顯，空白對照組和假手術(shù)對照組分布趨于集中，模型對照組與之比較分離顯著，通絡(luò)醒腦泡騰片各組分布回歸明顯，尤其是中劑量組回歸最為顯著；共鑒定了4個對分類貢獻(xiàn)度最大的內(nèi)源性代謝標(biāo)志物，分別為吲哚-5,6-醌、4-羥基苯基丙酮酸、皮質(zhì)醇和3-硫代乳酸。4個內(nèi)源性代謝標(biāo)志物豐度比較結(jié)

7、果顯示，通絡(luò)醒腦泡騰片各劑量組的吲哚-5,6-醌、4-羥基苯基丙酮酸和3-硫代乳酸的豐度值均較模型對照組顯著降低（P<0.05），皮質(zhì)醇僅通絡(luò)醒腦泡騰片低劑量組的豐度值較模型對照組顯著降低（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.通絡(luò)醒腦泡騰片具有良好的改善Aβ注射癡呆模型大鼠學(xué)習(xí)記憶功能和拮抗Aβ所致的大鼠海馬病理形態(tài)學(xué)改變的作用，提示其具有良好的益智作用。
　　2.通絡(luò)醒腦泡騰片能顯著促進(jìn)模型大鼠海馬區(qū)α-KGDH和