桂皮醛抗血栓和抗腫瘤作用的體內研究.pdf

1、桂皮醛(Cinnamaldehyde,CA)是樟科植物肉桂(CinnamonumcassiaPresl)的干皮及樹皮經水蒸氣蒸餾得到的揮發(fā)油——肉桂油(Cinnamonoil)中的主要成分，具有擴張周圍血管[1]、抗血小板聚集[2，3]、抗腫瘤[4-10]、抗細菌[11，12]、抗真菌[13，14]和抗突變[15，16]等作用，且毒副作用低。 目前國際上對桂皮醛抗血栓作用的研究主要集中在體外抗膠原蛋白、花生四烯酸(AA)、二磷酸

2、腺苷(ADP)誘導的血小板聚集，抑制凝血酶誘導的纖維蛋白原向纖維蛋白的轉化[2，3]，而對其體內抗血栓作用的研究尚未見報道。近年來，關于桂皮醛抗腫瘤作用的研究己取得較大進展，國外有許多學者研究發(fā)現，桂皮醛在體外對多種腫瘤細胞有殺傷、抑制和細胞毒作用，并且能夠誘導腫瘤細胞發(fā)生凋亡[4-10]，但在體內的抗腫瘤作用研究報道較少[9,10]，缺乏系統(tǒng)性，尤其是對荷瘤小鼠體內抗腫瘤活性和免疫調節(jié)的關系以及荷瘤小鼠給予桂皮醛后能否誘導腫瘤細胞發(fā)生

3、凋亡尚未見文獻報道。 我們在研究桂皮醛體外抗大鼠血小板聚集作用的基礎上，采用小鼠肺動脈栓塞和大鼠動-靜脈旁路血栓兩個動物模型，來研究桂皮醛體內抗血栓活性，初步探討了其作用機制。為了觀察桂皮醛的體內抗腫瘤活性及其機制，本文以小鼠S180移植性腫瘤為模型，探討了桂皮醛的抗腫瘤作用及其對荷瘤小鼠免疫功能的影響，并采用人胃癌SGC-7901裸鼠移植瘤動物模型觀察了桂皮醛的抗腫瘤作用及其與腫瘤細胞凋亡的關系。 目的:為了提供桂皮醛

4、在抗血栓和抗腫瘤方面開發(fā)、應用的實驗依據，我們從體內研究的角度，選用常規(guī)的實驗動物模型，初步探索桂皮醛的抗血栓和抗腫瘤活性及其機制。 方法與結果: 1.桂皮醛的急性毒性實驗1.1方法采用桂皮醛腹腔注射給藥方式進行。1.2結果桂皮醛小鼠腹腔注射的LD50為229.5mg/kg，95％的可信限為206.0～255.7mg/kg。 1.3結論:暴露了桂皮醛的固有毒性，了解了毒性的性質和程度，為下一步的抗血栓和抗腫瘤實驗

5、提供了劑量依據。 2.肉桂油β-環(huán)糊精包合物抗凝血和抗血栓作用的實驗研究 2.1方法:制備肉桂油β-環(huán)糊精包合物；小鼠出、凝血時間測定；膠原蛋白-腎上腺素誘發(fā)體內血栓形成實驗；大鼠動-靜脈旁路血栓形成實驗；對體外血液凝塊的溶解作用；大鼠體外血小板聚集實驗。 2.2結果:肉桂油β-環(huán)糊精包合物(βC-CD)對小鼠出、凝血時間無明顯延長作用；對膠原蛋白-腎上腺素引起的小鼠肺栓塞死亡無明顯保護作用；對血小板在動-靜脈旁

6、路中絲線上的沉積無明顯抑制作用；對體外血凝塊無顯著溶解作用。然而，不同濃度的βC-CD對大鼠體外血小板聚集均有抑制作用。 2.3結論:肉桂油β-環(huán)糊精包合物體內給藥無抗凝血和抗血栓作用，分析原因可能與肉桂油β-環(huán)糊精包合物中桂皮醛的含量由于包合工藝方面的限制，導致給藥劑量相對偏低，進入體內后起不到藥效作用所致。 3.桂皮醛對血小板聚集和血栓形成的影響 3.1方法:大鼠體外血小板聚集實驗；小鼠出、凝血時間測定；膠原

7、蛋白-腎上腺素誘發(fā)體內血栓形成實驗；大鼠動-靜脈旁路血栓形成實驗；大鼠給藥后體內血小板聚集實驗。 3.2結果:桂皮醛能夠明顯抑制膠原蛋白(0.5mg/mL)和凝血酶(1U/mL)誘導的大鼠體外血小板聚集，并呈劑量依賴性。桂皮醛對小鼠出、凝血時間均有顯著延長作用，并呈劑量依賴性。桂皮醛各劑量組對膠原蛋白-腎上腺素混合血栓誘導劑引起的小鼠肺動脈栓塞存活率都有顯著提高，其中100mg/kg桂皮醛腹腔注射(ip)組作用最顯著，存活率達到

8、100％。桂皮醛各劑量組都能明顯減輕動-靜脈旁路絲線血栓的重量。桂皮醛對膠原蛋白(0.5mg/mL)誘導的大鼠體外血小板聚集有顯著抑制作用。 3.3結論:桂皮醛具有明顯抗血小板聚集和體內抗血栓作用。 4.桂皮醛對小鼠肝癌H22、肉瘤S180和白血病L1210體內抗腫瘤作用研究 4.1方法:觀察小鼠肝癌H22、肉瘤S180移植瘤給藥后的瘤重、抑瘤率、胸腺及脾臟指數，以及小鼠白血病L1210移植瘤給藥后的存活時間。

9、 4.2結果:桂皮醛對小鼠肉瘤S180瘤株比較敏感，抗腫瘤活性好，25mg/kg，50mg/kg和100mg/kg劑量組的抑瘤率分別達到27.09％，49.78％和56.83％。對H22荷瘤小鼠的腫瘤生長無明顯抑制作用，不能顯著延長L1210白血病小鼠的存活時間。 4.3結論:桂皮醛對鼠源性瘤株的抗腫瘤敏感程度是不相同的。 5.桂皮醛抗腫瘤活性及對S180荷瘤小鼠免疫功能的影響 5.1方法:對小鼠移植瘤的抑

10、瘤作用觀察；T淋巴細胞轉化功能測定；NK細胞殺傷活性測定。 5.2結果:桂皮醛25mg/kg，50mg/kg和100mg/kg3個劑量組對小鼠肉瘤S180的生長均具有一定的抑制作用，抑瘤率分別為7.69％，33.08％和46.92％。其中50mg/kg和100mg/kg兩個劑量組的抑瘤率與生理鹽水對照組比較差異顯著(P＜0.01)。桂皮醛在抑制腫瘤生長的同時，對荷瘤小鼠胸腺和脾臟指數無明顯影響。桂皮醛(25mg/kg和50mg/

11、kg)劑量組可以升高白細胞，與荷瘤空白對照組比有顯著性差異(P＜0.01)，但桂皮醛(100mg/kg)劑量組和陽性對照藥卡鉑相似，顯著降低白細胞(P＜0.01)。桂皮醛(25mg/kg和50mg/kg)劑量組的T淋巴細胞增殖能力明顯高于荷瘤小鼠空白對照組(P＜0.05和P＜0.01)。而桂皮醛(100mg/kg)劑量組的T淋巴細胞增殖能力顯著低于荷瘤小鼠空白對照組(P＜0.01)。桂皮醛(25mg/kg)劑量組NK細胞殺傷活性高于荷瘤

12、小鼠空白對照組，但是無統(tǒng)計學差異，桂皮醛(50mg/kg)劑量組NK細胞殺傷活性明顯高于荷瘤小鼠空白對照組(P＜0.05)。但是桂皮醛(100mg/kg)劑量組NK細胞殺傷活性顯著低于荷瘤小鼠空白對照組(P＜0.05)。 5.3結論:桂皮醛除了具有良好的抑瘤效果外，在一定劑量范圍內可能還兼有保護和恢復機體免疫功能的作用。 6.桂皮醛對裸鼠人胃癌細胞移植瘤生長及凋亡的影響 6.1方法:體外細胞生長抑制實驗(MTT法

13、)；對裸鼠移植瘤的抑瘤作用觀察；流式細胞術檢測細胞凋亡率和細胞周期；透射電鏡觀察細胞形態(tài)學變化。 6.2結果桂皮醛對體外培養(yǎng)人皮膚黑色素瘤(A375)，乳腺癌(SKBr-2HL)，食道癌(Eca-109)，宮頸癌(Hela)，腎癌(GRC-1)，肝細胞瘤(HCC-9724)胃癌(SGC-7901)細胞具有不同程度的抑制增殖作用，其IC50的范圍為12.3～37.1μg/mL，其中以Eca-109對桂皮醛最敏感。桂皮醛25mg/k

14、g，50mg/kg和100mg/kg劑量組的抑瘤率分別為15.15％，41.67％和60.61％，其中桂皮醛50mg/kg和100mg/kg劑量組與生理鹽水對照組比，有顯著性差異(P＜0.01)。桂皮醛100mg/kg劑量組Go/G1期細胞比率較生理鹽水對照組明顯下降(P＜0.01)；桂皮醛50mg/kg和100mg/kg劑量組S期細胞比率較生理鹽水對照組明顯增多(P＜0.05和P＜0.01)。桂皮醛50mg/kg和100mg/kg劑量