海藻多糖（SP13）的抗血栓作用及其機制研究.pdf

1、海藻多糖(SP13)是在蜈蚣藻(蜈蚣藻屬Grateloupia)中獲得的一種均一的硫酸化半乳聚糖，該多糖含量高，提取工藝簡單。就國內(nèi)研究來看，海藻多糖在抗腫瘤、抗病毒、抗衰老、降血脂、降血糖、免疫增強等方面作用研究已經(jīng)積累了相當(dāng)多的資料。而對于海藻多糖抗凝血、抗血栓方面的研究報道甚少，對其作用的機制也不清楚。本研究首先通過復(fù)制尾靜脈血栓、動靜脈旁路血栓、急性腦血栓等各種動物血栓模型考察了海藻多糖抗血栓的藥效學(xué)作用；并利用大鼠急性腦血栓模

2、型，通過考察SP13對血栓形成的主要因素(如血液流變學(xué)、纖溶系統(tǒng)、凝血系統(tǒng)和血液成分的理化性質(zhì)改變等因素)的影響，研究了SP13抗血栓作用的機制，旨在為進一步開發(fā)海藻多糖作為抗凝、抗血栓作用藥物提供實驗和理論依據(jù)。 一、海藻多糖抗血栓作用研究 1.SP13對小鼠凝血時間(CT)的影響 將小鼠隨機分為五組：對照組，SP13低劑量組(6.5mg/kg)、SP13中劑量組(13.0mg/kg)、SP13高劑量組(26.

3、0mg/kg)，陽性對照藥低分子肝素(LMWH)組(600IU/kg)。各組動物均按0.2ml/10g每天灌胃給予藥液(對照組給予等量生理鹽水)1次，連續(xù)給藥7天后，通過玻片法和毛細玻管法觀察其對小鼠凝血時間(CT)的影響。結(jié)果表明，與對照組比較，SP13中(13.0mg/kg)、高(26.0mg/kg)劑量組能明顯延長正常小鼠的凝血時間(P<0.05)，呈劑量依賴性趨勢。提示SP13預(yù)防口服給藥能明顯延長凝血時間，具有明顯抗凝作用。

4、 2.小鼠尾靜脈血栓模型 同上將小鼠隨機分為五組，各組動物均按0.2ml/10g每天灌胃給予藥液(對照組給予等量生理鹽水)1次，連續(xù)給藥7天后，通過角叉菜膠誘導(dǎo)小鼠尾靜脈血栓形成，觀察SP13對小鼠尾靜脈血栓形成的影響。結(jié)果表明，與對照組比較，SP13低(6.5mg/kg)、中(13.0mg/kg)、高(26.0mg/kg)劑量組均能明顯抑制小鼠尾靜脈血栓的形成作用(P<0.05，P<0.01)，并呈劑量依賴性趨勢。提示S

5、P13預(yù)防口服給藥能明顯抑制靜脈血栓的形成。 3.大鼠動靜脈旁路血栓模型 將大鼠隨機分為五組：對照組，SP13低劑量組(4.5mg/kg)、SP13中劑量組(9.0mg/kg)、SP13高劑量組(18.0mg/kg)，陽性對照藥LMWH組(400IU/kg)，各組動物均按1.0ml/100g每天灌胃給予藥液(對照組給予等量生理鹽水)1次，連續(xù)給藥7天后檢測SP13對大鼠動靜脈旁路血栓形成的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對照組比較，SP

6、13中(9.0mg/kg)、高(18.0mg/kg)劑量組能顯著抑制大鼠動靜脈旁路血栓形成(P<0.05，P<0.01)，抑制率分別為24.60％和34.13％。提示SP13預(yù)防口服給藥能明顯抑制動靜脈血栓的形成。 4.大鼠急性腦血栓模型 同上將大鼠隨機分為五組，各組動物均按1.0ml/100g每天灌胃給予藥液(對照組給予等量生理鹽水)1次，連續(xù)給藥7天。采用從頸總動脈注入血栓誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)血栓形成的方法，建立大鼠急性腦血栓

7、模型，通過測定腦組織中伊文思藍含量和腦重，觀察SP13對急性腦血栓形成的影響。結(jié)果表明，與對照組比較，SP13中(9.0mg/kg)、高(18.0mg/kg)劑量組能明顯減少栓塞側(cè)腦組織中伊文思藍的含量(P<0.05)。提示SP13預(yù)防口服給藥能明顯抑制大鼠腦血栓的形成。 二、海藻多糖抗血栓作用的機制研究 將大鼠隨機分為假手術(shù)組，模型組，SP13低劑量組(4.5mg/kg)、SP13中劑量組(9.0mg/kg)、SP13

8、高劑量組(18.0mg/kg)，陽性對照藥LMWH組(400IU/kg)，各組動物均按1.0ml/100g每天灌胃給予藥液(假手術(shù)組和模型組給予等量生理鹽水)1次，連續(xù)給藥7天。采用從頸總動脈注入血栓誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)血栓形成的方法，建立大鼠腦血栓模型，考察SP13對下列指標(biāo)的影響： 1.局部腦組織血流量(rCBF) 模型組大鼠rCBF明顯減少，與假手術(shù)組比較有顯著性差異(P<0.01)；連續(xù)給藥7天后，與模型組比較，SP13中

9、(9.0mg/kg)、高(18.0mg/kg)劑量組能明顯增加大鼠rCBF。 2.血液流變學(xué)指標(biāo)檢測 大鼠的血液流變學(xué)多項指標(biāo)(全血低切粘度LBD、全血中切粘度MBD、全血高切粘度HBD和血漿粘度ηp)。與假手術(shù)組比較，模型組全血LBD、MBD、HBD和ηp都明顯增高(P<0.05)，提示大鼠血液的高凝狀態(tài)可能是急性腦血栓形成的病理基礎(chǔ)。連續(xù)給藥7天后，與模型組比較，SP13低(4.5mg/kg)、中(9.0mg/kg)

10、、高(18.0mg/kg)劑量組均呈現(xiàn)全血LBD、MBD、HBD和ηp降低的趨勢；SP13中(9.0mg/kg)、高(18.0mg/kg)劑量組在降低ηp方面效果明顯(P<0.05)，SP13高(18.0mg/kg)劑量組能顯著降低全血HBD(P<0.05)。顯示SP13預(yù)防口服給藥能明顯降低血液粘度、改善血液的高凝狀態(tài)。 3.優(yōu)球蛋白溶解時間(ELT) 與假手術(shù)組比較，模型組ELT明顯延長(P<0.05)，提示大鼠血液

11、的纖溶系統(tǒng)平衡功能的紊亂可能與腦血栓的形成有關(guān)。連續(xù)給藥7天后，與模型組比較，SP13低(4.5mg/kg)、中(9.0mg/kg)、高(18.0mg/kg)劑量組均能不同程度的縮短ELT，其中以SP13高(18.0mg/kg)劑量組的作用明顯(P<0.05)。提示SP13抗血栓形成機制與纖溶系統(tǒng)有關(guān)。 4.血清纖維蛋白降解產(chǎn)物(FDP) 與假手術(shù)組比較，模型組纖維蛋白降解產(chǎn)物(FDP)明顯增加。連續(xù)給藥7天后，與模型組

12、比較，SP13低(4.5mg/kg)、中(9.0mg/kg)、高(18.0mg/kg)劑量組和陽性對照藥LMWH組(400IU/kg)均無顯著差異。顯示SP13對纖溶系統(tǒng)影響不明顯。 5.凝血酶原時間(PT)和凝血酶時間(TT)的影響 與假手術(shù)組比較，SP13中(9.0mg/kg)、高(18.0mg/kg)劑量組可明顯延長大鼠凝血酶原時間(PT)和凝血酶時間(TT)(P<0.05，P<0.01)。顯示SP13預(yù)防口服給藥

13、能通過影響凝血功能發(fā)揮抗血栓形成的作用。 6.二磷酸腺苷(ADP)誘導(dǎo)的大鼠全血血小板聚集 與假手術(shù)組比較，模型組血小板最大聚集度明顯增高(P<0.01)，提示大鼠急性腦血栓的形成與全血血小板聚集增強有關(guān)。連續(xù)給藥7天后，與模型組比較，SP13低(4.5mg/kg)、中(9.0mg/kg)、高(18.0mg/kg)劑量組均對ADP誘導(dǎo)的大鼠全血血小板聚集均有明顯的抑制作用，而且隨著劑量的增加抑制作用逐漸增強，呈劑量依賴性

14、趨勢。(P<0.05，P<0.01，P<0.01)。 7.血栓素A2(TXA2)和前列腺素12(PGI2)的比例 與假手術(shù)組比較，模型組PGI2含量顯著減少，TXA2含量明顯增高，TXA2/PGI2明顯增加(P<0.001)，提示大鼠急性腦血栓形成與血小板被活化，促進血栓形成有關(guān)。連續(xù)給藥7天后，與模型組比較，SP13低(4.5mg/kg)、中(9.0mg/kg)、高(18.0mg/kg)劑量組均能不同程度地升高PGI2

15、的含量，降低TXA2的含量，明顯降低異常升高的TXA2/PGI2比值(P<0.05，P<0.05，P<0.01)。 結(jié)論： 1.SP13能明顯延長小鼠體外凝血時間和抑制小鼠尾靜脈血栓形成； 2.SP13能明顯抑制大鼠動靜脈旁路血栓以及腦血栓形成： 3.在大鼠急性腦血栓模型的實驗中，SP13能增加大鼠的局部腦組織血流量(rCBF)；改善全血粘度和血漿粘度；縮短優(yōu)球蛋白溶解時間(ELT)；明顯延長凝血酶原時間

16、(PT)和凝血酶時間(TT)；明顯抑制ADP誘導(dǎo)的血小板聚集；并不同程度的升高PGI2的含量，降低TXA2的含量，明顯降低異常升高的TXA2/PGI2比值； 4.在大鼠急性腦血栓模型的實驗中，SP13對血清纖維蛋白降解產(chǎn)物(FDP)的影響則不明顯，提示SP13可能并非通過激活纖溶系統(tǒng)促進血栓溶解而發(fā)揮抗血栓作用。 綜上所述，海藻多糖(SP13)具有明顯的抗血栓作用，其機制與其抑制血小板聚集，降低血液粘度，改善血液的高凝狀