多種移植瘤中癌干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志表達(dá)及血管內(nèi)皮細(xì)胞來源的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：以體內(nèi)移植瘤模型與體外條件誘導(dǎo)培養(yǎng)體系為基礎(chǔ)，初步探討癌干細(xì)胞與腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞生成的關(guān)系，其中著重明晰移植瘤血管生成方式與血管內(nèi)皮細(xì)胞的來源，并進(jìn)一步觀察癌細(xì)胞系中癌干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化潛能的特性。 方法：采用裸鼠腋窩皮下注射癌細(xì)胞的方法建立3種移植瘤模型，2周后移植瘤直徑達(dá)1cm上時(shí)，取移植瘤組織進(jìn)行常規(guī)病理檢測移植瘤的組織結(jié)構(gòu)，及檢測ki-67在移植瘤組織內(nèi)細(xì)胞表達(dá)和分析腫瘤細(xì)胞的增殖情況；然后使用免疫組織化學(xué)方

2、法分別檢測單克隆抗人和單克隆抗鼠內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物(CD31、CD34和CD105)在移植瘤內(nèi)新生血管的表達(dá)情況，以確定移植瘤內(nèi)新生血管內(nèi)皮細(xì)胞的來源；再進(jìn)一步用免疫組織化學(xué)的方法檢測鱗癌干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志物(CD133、CD44、ESA和E-Cadherin)和肝癌干細(xì)胞標(biāo)志物(CD133、CD44、c-kit和CK19)的表達(dá)情況；最后將TCA8113細(xì)胞在內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基中誘導(dǎo)分化，并且檢測第3代和第5代細(xì)胞表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物(CD31

3、、CD34和CD105)的情況。 結(jié)果：建立的3種皮下移植瘤，HE染色常規(guī)病理證實(shí)這些移植瘤具有類似人原發(fā)性癌的形態(tài)學(xué)特征，且皮下種植瘤體易分離便于觀察、測量和活體檢查。這些移植瘤內(nèi)腫瘤細(xì)胞的ki-67呈強(qiáng)表達(dá)，與其增殖性和成瘤性強(qiáng)有一定的關(guān)系。移植瘤內(nèi)新生血管內(nèi)皮細(xì)胞抗鼠CD31、抗鼠CD34和抗鼠CD105免疫組化結(jié)果是陽性，而抗人CD31、抗人CD34和抗人CD105陰性，其中以抗鼠CD34染色的微血管密度值最高。鱗癌干細(xì)

4、胞相關(guān)標(biāo)志物(CD133、CD44、ESA和E-Cadherin)和肝癌干細(xì)胞標(biāo)志物(CD133、CD44、c-kit和CK19)的表達(dá)在各自的移植瘤中都呈陽性表達(dá)，其中TCA8113移植瘤和TCA8113-M1移植瘤中CD133和E-Cadherin蛋白相對(duì)陽性表達(dá)更加強(qiáng)，BEL-7404移植瘤中CD133和c-kit的陽性表達(dá)相對(duì)比較高。體外誘導(dǎo)分化培養(yǎng)的TCA8113細(xì)胞隨傳代時(shí)間而逐漸向長梭型變化，第3代和第5代細(xì)胞抗人CD31