Neuritin誘導(dǎo)MSCs向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化后的形態(tài)與標(biāo)志物鑒定.pdf

1、目的：
　　 （1）探討體外分離、培養(yǎng)大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞（MSCs）的方法；
　　 （2）建立Neuritin體外誘導(dǎo)大鼠MSCs分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞的最佳實(shí)驗(yàn)條件；
　　 （3）通過觀察Neuritin誘導(dǎo)后骨髓源性神經(jīng)元樣細(xì)胞的形態(tài)以及標(biāo)志物指標(biāo)，評價Neuritin 誘導(dǎo)MSCs分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞的作用。
　　 方法：
　　 （1）采用全骨髓貼壁篩選法分離、培養(yǎng)、純化大鼠MSCs；
　　

2、 （2）利用免疫熒光技術(shù)檢測大鼠MSCs表達(dá)表面標(biāo)志物CD44/CD29/CD90/CD34/CD45的情況；
　　 （3）分別于6小時、24小時、48小時、72小時，檢測不同濃度Neuritin誘導(dǎo)的骨髓源性神經(jīng)元樣細(xì)胞的陽性率和細(xì)胞活力，確立Neuritin誘導(dǎo)大鼠MSCs分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞的最佳實(shí)驗(yàn)條件；
　　 （4）免疫熒光技術(shù)和Western blot技術(shù)檢測骨髓源性神經(jīng)元樣細(xì)胞中神經(jīng)細(xì)胞標(biāo)志物(NSE)、神經(jīng)

3、細(xì)胞樹突標(biāo)記物(MAP-2)、星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物（GFAP）的定位和表達(dá)水平；
　　 結(jié)果：
　　 （1）應(yīng)用全骨髓貼壁篩選法，在本實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條件下，建立了簡單、高效的MSCs的培養(yǎng)和分離方法；
　　 （2）MSCs免疫熒光結(jié)果顯示：在本實(shí)驗(yàn)室條件下培養(yǎng)的MSCs表達(dá)MSCs表面標(biāo)志物CD29、CD44和CD90，不表達(dá)造血干細(xì)胞的表面標(biāo)記物CD34、CD45。
　　 （3）不同濃度Neuritin誘導(dǎo)M

4、SCs6小時、24小時、48小時、72小時，神經(jīng)元樣細(xì)胞陽性率和細(xì)胞活力檢測結(jié)果顯示：0.25μg/ml組神經(jīng)元樣細(xì)胞陽性率均明顯低于0.5μg/ml組，而0.5μg/ml組以上隨著Neuritin濃度增高，神經(jīng)元樣細(xì)胞陽性率而呈下降趨勢，0.5μg/ml在誘導(dǎo)后24小時神經(jīng)元樣細(xì)胞陽性最高；細(xì)胞活力隨時間延長而呈下降趨勢，24小時誘導(dǎo)組活細(xì)胞率均大于82％，其中0.25μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/mlNeuritin組細(xì)

5、胞活力大于對照組。故0.5μg/ml Neuritin誘導(dǎo)大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞24小時，其誘導(dǎo)效果最佳。
　　 （4）0.5μg/ml Neuritin誘導(dǎo)MSCs24小時后的骨髓源性神經(jīng)元樣細(xì)胞免疫熒光和Western Blot結(jié)果顯示：和對照組比較誘導(dǎo)組細(xì)胞定位于胞漿的神經(jīng)細(xì)胞標(biāo)志物（NSE）、神經(jīng)細(xì)胞樹突標(biāo)記（MAP-2）均有表達(dá)，定位于胞漿的星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物GFAP沒有表達(dá)；
　　 結(jié)論：
　　 （1）在本