siHybrids技術(shù)沉默銅綠假單胞菌外排泵mexB基因體外效應(yīng)研究.pdf

1、目的：研究siHybrids技術(shù)對(duì)銅綠假單胞菌PAO1外排泵mexB基因體外沉默效應(yīng)。
　　 方法：1.針對(duì)銅綠假單胞菌野生株P(guān)AO1外排泵mexB基因設(shè)計(jì)并合成3條特異性siHybrids分子和一條陰性對(duì)照siHybrids分子。
　　 2.在分子濃度為50nM下，分別以合成設(shè)計(jì)的siHybrids分子干擾銅綠假單胞菌PAO1,并設(shè)實(shí)驗(yàn)組為銅綠假單胞菌PAO1空白對(duì)照組，陰性對(duì)照組scamble（sc）-001，干預(yù)組

2、siHybrids(si)-001，siHybrids（si）-002及siHybrids（si）-003。
　　 3.分別在干預(yù)12小時(shí)后及24小時(shí)后采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組中外排泵靶基因mexB[1]基因mRNA表達(dá)水平。
　　 4.進(jìn)一步采用Mueller-Hinton倍比稀釋法檢測(cè)50nM濃度的siHybrids分子對(duì)銅綠假單胞菌PAO1與氯霉素(CP)，紅霉素(EM)，左氧氟沙星（L-OFLX）干預(yù)作

3、用前后的MIC(最小抑菌濃度).
　　 結(jié)果：1.不同siHybrids分子干預(yù)PAO1 12小時(shí)后，mexB基因mRNA的表達(dá)量無明顯差異性。
　　 2.干預(yù)24小時(shí)后，mexB基因mRNA的表達(dá)量干預(yù)組（si-001，si-002，si-003）比空白對(duì)照組，陰性對(duì)照組（sc-001）有明顯下降。
　　 3.對(duì)比干預(yù)12小時(shí),24小時(shí)后mexB基因mRNA表達(dá)量，可以發(fā)現(xiàn)空白對(duì)照組，陰性對(duì)照組（sc-001）

4、mRNA的表達(dá)量成上升趨勢(shì)，而干預(yù)組（si-001，si-002，si-003）mexB基因mRNA表達(dá)量均呈下降趨勢(shì)。
　　 4.siHybrids分子在干預(yù)24小時(shí)前后氯霉素(CP)，紅霉素(EM)，左氧氟沙星（L-OFLX）的MIC無明顯差異性。
　　 結(jié)論：在mRNA的表達(dá)水平上，siHybrids分子能體外干預(yù)銅綠假單胞菌PAO1 mexB基因mRNA的表達(dá)，此種沉默作用呈現(xiàn)時(shí)間依賴性，且在24小時(shí)能有效地發(fā)揮