LC3,Bcl-2及PGC-1a在D-半乳糖誘導(dǎo)的擬老化大鼠耳蝸中的作用.pdf

1、目的：研究自噬與凋亡相關(guān)通路及核對線粒體調(diào)控在大鼠耳蝸老化過程中的可能作用機制，并初步探討老年性耳聾可能的發(fā)病機制，為老年性耳聾的治療和預(yù)防提供新的思路和方法。
　　方法：選取耳廓反應(yīng)靈敏的7周齡SD大鼠128只，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后隨機分為四組：D-半乳糖+雷帕霉素組(n=16)，D-半乳糖+DMSO組(n=16)，D-半乳糖+生理鹽水組(n=48)，生理鹽水對照組（n=48）。D-半乳糖+雷帕霉素組每日按照0.02mg/Kg的劑量

2、腹腔注射雷帕霉素半小時后按照500mg/Kg的劑量頸部皮下注射D-半乳糖，D-半乳糖+DMSO組每日腹腔注射與雷帕霉素組等劑量的DMSO，半小時后按照500mg/Kg的劑量頸部皮下注射D-半乳糖，D-半乳糖+生理鹽水組每日腹腔注射與雷帕霉素等體積的生理鹽水半小時后按照500mg/Kg的劑量頸部皮下注射D-半乳糖，生理鹽水組每日腹腔注射與雷帕霉素等體積的生理鹽水半小時后腹腔注射與D-半乳糖等體積的生理鹽水，連續(xù)注射8周。注射后將D-半乳糖

3、+生理鹽水組和生理鹽水對照組分為給藥后0，6，17個月三個亞組，每亞組16只。免疫組織化學(xué)法檢測大鼠耳蝸中LC3蛋白的定位表達(dá)。實時定量PCR法檢測大鼠耳蝸組織中LC3，Bcl-2，PGC-1a基因的mRNA表達(dá)。Western-blot檢測大鼠耳蝸中LC3，Bcl-2，PGC-1a基因的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：免疫組化示LC3蛋白廣泛表達(dá)于大鼠內(nèi)耳的外側(cè)壁、基底膜、螺旋神經(jīng)節(jié),在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)均有表達(dá)。給藥后0個月，大鼠耳蝸LC3

4、在D-半乳糖+雷帕霉素組較D-半乳糖+生理鹽水組表達(dá)增加，LC3、Bcl-2、PGC-1a在D-半乳糖+生理鹽水組較生理鹽水組表達(dá)增加。給藥后6個月LC3、Bcl-2、PGC-1a在D-半乳糖+生理鹽水組較生理鹽水組表達(dá)增加。給藥后17個月LC3、Bcl-2、PGC-1a在D-半乳糖+生理鹽水組較生理鹽水組表達(dá)無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。給藥后6個月與0個月相比LC3，Bcl-2， PGC-1a表達(dá)增加。給藥后17個月較0個月LC3、PGC-1a