黃精中小分子糖類(lèi)成分的研究.pdf

1、目的:通過(guò)實(shí)驗(yàn)揭示炮制對(duì)黃精中多糖、小分子糖等糖類(lèi)成分的影響;在此基礎(chǔ)上對(duì)黃精小分子糖部位的藥理活性進(jìn)行研究,為黃精中小分子糖的研究開(kāi)發(fā)和臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù);利用現(xiàn)代波譜及色譜技術(shù)對(duì)低聚糖的分離純化和結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究,為進(jìn)一步研究黃精的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)以及低聚糖系列產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)提供方法參考;優(yōu)選適合工業(yè)化生產(chǎn)的最佳提取純化工藝,為開(kāi)發(fā)利用黃精中小分子糖類(lèi)和提高黃精的商品價(jià)值奠定基礎(chǔ)。
　　方法:(1)采用苯酚-硫酸法分別對(duì)常壓和高壓蒸制黃

2、精樣品中的總糖、多糖和小分子糖進(jìn)行含量測(cè)定,揭示炮制后黃精中多糖、小分子糖等糖類(lèi)成分的變化規(guī)律;(2)采用腹腔注射環(huán)磷酰胺的方法建立免疫抑制模型,考察黃精中小分子糖對(duì)環(huán)磷酰胺致免疫抑制小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)和吞噬百分率、溶血素和溶血空斑形成的影響;(3)采用D101大孔吸附樹(shù)脂柱、活性炭柱層析、SephadexLH-20凝膠柱層析等一系列方法對(duì)黃精中低聚糖進(jìn)行分離純化,對(duì)于得到的低聚糖樣品進(jìn)行理化性質(zhì)鑒別;苯酚-硫酸法測(cè)定其總糖含量;

3、HPGPC測(cè)定純度和分子量;薄層層析和乙酰化GC分析單糖組成;利用紅外光譜、1HNMR和13CNMR對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行進(jìn)一步分析;(4)以黃精中小分子糖含量為指標(biāo),考察提取溫度、時(shí)間、次數(shù)、料液比等因素對(duì)小分子糖提取率的影響,在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,利用正交試驗(yàn)法對(duì)黃精中小分子糖的提取工藝條件進(jìn)行優(yōu)化;通過(guò)比較AB-8、D101、XDA-6和LSA-20四種大孔吸附樹(shù)脂對(duì)小分子糖的純化性能,篩選出較合適的樹(shù)脂并確定最佳的上樣量、上樣濃度、洗脫劑

4、用量和洗脫流速。
　　結(jié)果:(1)常壓和高壓蒸制黃精樣品中多糖含量均隨蒸制時(shí)間的延長(zhǎng)呈下降趨勢(shì),常壓蒸制黃精樣品中小分子糖含量50h前呈下降趨勢(shì),50h～70h含量變化趨勢(shì)不明顯?？傮w來(lái)看,小分子糖含量在蒸制時(shí)間20h前最高,且變化較為平緩;(2)黃精中小分子糖能夠顯著提高環(huán)磷酰胺致免疫抑制小鼠腹腔巨噬細(xì)胞對(duì)雞紅細(xì)胞的吞噬指數(shù)和吞噬百分率,可顯著促進(jìn)溶血素和溶血空斑的形成;(3)分離純化得到1個(gè)低聚糖樣品HJG-1:灰白色疏松粉末

5、,純度較高,總糖含量為91.29％,分子量為1471,為單一葡萄糖組成的D—吡喃葡聚糖,分子結(jié)構(gòu)中葡萄糖的連接方式主要為1→3和1→4,苷鍵構(gòu)型以β—糖苷鍵為主,還含有少量的α—糖苷鍵;(4)黃精中小分子糖的最佳提取工藝為提取溫度90℃,料液比1:30,提取時(shí)間2h;優(yōu)選的樹(shù)脂純化方法即將約4倍柱床體積的濃度為36.32mg/ml的黃精小分子糖溶液通過(guò)AB-8大孔吸附樹(shù)脂柱,進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附,用約8倍柱床體積的蒸餾水洗脫,流速1.0ml/m