胃癌組織MMP-9基因與外周蛋白相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　檢測胃癌組織中基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)基因、術(shù)前外周血清、胃液中基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)水平,探討組織中MMP-9基因表達(dá)水平與外周蛋白含量之間的關(guān)系;比較胃癌、腫瘤遠(yuǎn)端、正常對照胃組織之間 MMP-9基因及蛋白表達(dá)差異;比較胃癌組與對照組之間術(shù)前外周血清、胃液蛋白水平差異;分析胃癌患者基質(zhì)金屬蛋白酶-9表達(dá)與腫瘤臨床病理特征之間相關(guān)性。
　　方法:
　　收集于2005年6月至2005年12月期間在汕頭大

2、學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院外科診治的胃癌病例45例,采集各項檢測指標(biāo),進(jìn)行實驗檢測及分析。
　　1)術(shù)前抽取患者外周靜脈血,分離出血清后通過酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)方法檢測術(shù)前外周血清中MMP-9蛋白水平。
　　2)術(shù)前經(jīng)鼻胃管吸取胃液,胃液經(jīng)緩沖液中和及離心后,通過酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)方法檢測胃癌患者術(shù)前胃液中MMP-9蛋白水平。
　　3)剪取胃癌手術(shù)切除后的新鮮胃癌及遠(yuǎn)端胃組織塊,組織塊經(jīng) TRIZOL液

3、提取組織總RNA,逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后,進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)2％瓊脂糖凝膠電泳分離,電泳條帶在數(shù)碼凝膠圖像處理系統(tǒng)下觀察并拍照、記錄、分析結(jié)果并送基因測序分析產(chǎn)物特異性。
　　4)應(yīng)用免疫組織化學(xué)(IHC)二步法檢測胃癌組織、遠(yuǎn)端組織、正常對照組織中MMP-9蛋白表達(dá)陽性率。
　　結(jié)果:
　　1)胃癌組織95.6%(43/45)陽性表達(dá)基質(zhì)金屬蛋白酶-9基因,mRNA平均灰度值為0.61±0.6;遠(yuǎn)端胃組織40

4、%(18/45)陽性表達(dá)基因,mRNA平均灰度值為0.44±0.44,二者差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);正常對照組織10%(1/10)陽性表達(dá)MMP-9基因, mRNA平均灰度值0.03±0.06;胃癌組、遠(yuǎn)端組、對照組相互比較,前二者表達(dá)量均顯著高于對照組MMP-9基因表達(dá)量(P<0.01)。
　　2)免疫組織化學(xué)法檢測胃癌組織86.7%(39/45)金屬基質(zhì)蛋白酶-9蛋白表達(dá)陽性,遠(yuǎn)端胃組織中26.7%(12/45)蛋白表

5、達(dá)陽性,二者差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);而與正常對照組織10%(1/10)比較,腫瘤組表達(dá)量顯著高于正常對照組MMP-9表達(dá)陽性率(P<0.01),蛋白染色陽性率與腫瘤侵犯漿膜層相關(guān)(P<0.05)。
　　3)胃癌組及對照組病例均可于血清中測及 MMP-9蛋白分泌,胃癌組血清中金屬蛋白酶平均水平為406.03±257.18 ng/ml,顯著高于對照組的167.35±54.04ng/ml(P<0.01);TNM晚期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

6、陽性者術(shù)前外周血清蛋白含量顯著高于TNM早期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性者(P<0.01)。
　　4) MMP-9蛋白可于46.7%(21/45)胃癌組術(shù)前胃液中測及,平均水平為77.59±191.97ng/ml;對照組可于10%(1/10)測及MMP-9蛋白,蛋白平均水平為0.81±2.39ng/ml,胃癌組蛋白水平顯著高于對照組(P<0.01);腫瘤侵犯至漿膜層、TNM晚期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性者蛋白含量顯著高于腫瘤未侵犯至漿膜層、TNM早期、

7、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性者(P<0.01)。
　　5)腫瘤組織中基因表達(dá)與外周蛋白含量相關(guān)分析,腫瘤組織基因表達(dá)與術(shù)前胃液中蛋白含量呈顯著性相關(guān)(r=0.366,P<0.05);而與術(shù)前外周血清中蛋白含量無相關(guān)性(P>0.05)。
　　6)腫瘤家族史陰陽性組間 MMP-9表達(dá)無顯著性差異(P>0.05);未發(fā)現(xiàn)胃癌中不同血型與MMP-9表達(dá)有相關(guān)性(P>0.05)。
　　結(jié)論:
　　1)胃癌患者機(jī)體可能存在著MMP-9基因

8、的異?；罨氨磉_(dá),檢測組織中基因表達(dá)對腫瘤診斷具有一定意義。
　　2)檢測胃癌組織中蛋白表達(dá)情況對腫瘤診斷及惡性程度判斷具有一定意義。
　　3)檢測胃癌患者術(shù)前血清中蛋白酶水平能更好反映腫瘤進(jìn)展,對臨床腫瘤病情評估及制定個體化治療方案起指導(dǎo)意義。
　　4)檢測胃癌患者術(shù)前胃液中蛋白酶水平能更好地反映腫瘤進(jìn)展,對臨床腫瘤病情評估及制定個體化治療方案起指導(dǎo)意義,檢測胃液中蛋白酶含量為胃癌病情評估提供了無創(chuàng)的評估手段。