年齡相關(guān)性白內(nèi)障與正常晶狀體上皮細(xì)胞中差異表達(dá)基因的篩選.pdf

1、目的：該研究收集年齡相關(guān)性白內(nèi)障與正常晶狀體的囊膜標(biāo)本,利用改良的消減雜交法為工具,構(gòu)建人年齡相關(guān)性白內(nèi)障與正常晶狀體上皮細(xì)胞的差異表達(dá)cDNA文庫(kù),篩選年齡相關(guān)性白內(nèi)障與正常晶狀體上皮的差異表達(dá)基因,并驗(yàn)證部分基因的功能,以篩選年齡相關(guān)性白內(nèi)障的致病相關(guān)基因,為研究白內(nèi)障發(fā)病機(jī)理,防治白內(nèi)障提供新思路.結(jié)論:(1)用改良的消減雜交法結(jié)合選擇性PCR法可以從少量標(biāo)本中快速有效地構(gòu)建差異表達(dá)cDNA文庫(kù),且文庫(kù)的質(zhì)量較高,大片段比例較高.

2、(2)該研究成功構(gòu)建了年齡相關(guān)性白內(nèi)障與正常晶狀體上皮的差異表達(dá)cDNA文庫(kù),文庫(kù)約含4000個(gè)克隆,經(jīng)酶切鑒定其中大片斷比例較高.(3)經(jīng)用Southern點(diǎn)雜交法可以從消減cDNA文庫(kù)中一次性快速篩選大量候選基因片斷.(4)所建的年齡相關(guān)性白內(nèi)障與正常晶狀體上皮的差異表達(dá)cDNA文庫(kù)中,成功篩出三個(gè)新基因,對(duì)這些基因的分析表明,其均有開(kāi)放讀框,編碼的蛋白質(zhì)與已知蛋白的同源性均>25﹪,可以認(rèn)為其為保守基因.(5)死亡因子相關(guān)基因15