鼻腔給予神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)鋁毒性阿爾茨海默病大鼠模型神經(jīng)保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文利用向大鼠側(cè)腦室注射三氯化鋁的方法建立非轉(zhuǎn)基因AD大鼠模型，通過(guò)觀察經(jīng)鼻腔給予NGF對(duì)鋁中毒AD大鼠模型行為學(xué)、組織學(xué)及生物化學(xué)等方面的影響，綜合評(píng)價(jià)經(jīng)鼻腔給予NGF對(duì)鋁毒性AD大鼠模型的神經(jīng)保護(hù)作用，并初步探討NGF可能的作用機(jī)理，為采用鼻腔給予NGF這一非創(chuàng)傷性途徑治療AD提供理論依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)方法： 利用向大鼠側(cè)腦室注射三氯化鋁(AlCl<,3>)的方法建立AD模型。應(yīng)用Moms水迷宮、蘇木素．伊紅(Hemato

2、xylin and Eosin，HE)染色、免疫印記(Western blot)、免疫組化ABC染色等技術(shù)，觀察鋁中毒大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力、大腦皮層和海馬神經(jīng)元數(shù)量形態(tài)、β-淀粉樣蛋白(Aβ)沉積、β-淀粉樣前體蛋白(β-amyloid precursorprotein，β-APP)和ADAM10表達(dá)水平的變化，以及經(jīng)鼻腔給予神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)后，對(duì)這些變化的影響。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1、Morris水迷宮檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組(側(cè)腦

3、室注射AlCl<,3>+鼻腔給予NGF)大鼠逃避潛伏期及穿越平臺(tái)次數(shù)與對(duì)照組(側(cè)腦室注射saline+鼻腔給予saline)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；而模型組(側(cè)腦室注射A1C13+鼻腔給予saline)大鼠逃避潛伏期與對(duì)照組比較明顯延長(zhǎng)、穿越平臺(tái)次數(shù)與對(duì)照組比較明顯減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 2、蘇木素-伊紅(HE)染色對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組大鼠皮層、海馬神經(jīng)元排列密集、形態(tài)正常、胞膜完整；模型組大鼠神經(jīng)

4、元明顯變性缺失、排列稀疏淡染、形態(tài)異常、胞膜破損、可見(jiàn)空泡樣變。 3、免疫印記(Westem blot)各組大鼠β-APP表達(dá)水平：模型組(整合光密度值：皮層1.28±0.13、海馬1.41±0.26)及實(shí)驗(yàn)組(整合光密度值：皮層1.16±0.15、海馬1.32±0.23)大鼠皮層、海馬β-APP含量均明顯高于對(duì)照組(整合光密度值：皮層0.22±0.04、海馬0.31±0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 各組

5、大鼠ADAM10蛋白表達(dá)水平：ADAM10條帶在實(shí)驗(yàn)組(整合光密度值：皮層0.93±0.16、海馬0.98±0.20)顏色深，與對(duì)照組(整合光密度值：皮層0.19±0.07、海馬0.21±0.06)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；ADAM10條帶在模型組(整合光密度值：皮層0.16±0.04、海馬0.19±0.05)及對(duì)照組顏色均較淡，兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 4、免疫組化．ABC染色AB免疫組化ABC染色

6、顯示，對(duì)照組Aβ陽(yáng)性反應(yīng)物為陰性，說(shuō)明Aβ在正常狀態(tài)下幾乎不表達(dá)或表達(dá)極微，實(shí)驗(yàn)組亦為陰性；而模型組大鼠皮層及海馬均可見(jiàn)較多的Aβ陽(yáng)性反應(yīng)物。 研究結(jié)論： 1、經(jīng)鼻腔給予NGF能對(duì)抗鋁的神經(jīng)毒作用，有效地阻止鋁中毒引起的學(xué)習(xí)記憶能力減退、神經(jīng)元變性缺失等AD樣病變的發(fā)生，對(duì)鋁毒性AD大鼠模型具有神經(jīng)保護(hù)作用。 2、上調(diào)ADAM10的蛋白表達(dá)水平，使過(guò)度表達(dá)的β-APP能通過(guò)α-分泌酶途徑降解，增加可溶性的α-AP