microRNAs在卵巢癌細胞獲得耐藥表型中的作用及其機制研究.pdf

1、目的：目前針對卵巢癌耐藥機制的研究以細胞學體外實驗為主，更加接近臨床真實性的動物體內模型還需要不斷的完善和改進。本文首先建立了三代裸鼠體內獲得性順鉑耐藥的動物模型，并篩選在動物體內獲得耐藥過程中發(fā)生變化的micoRNAs 及基因。MicroRNA（miRNAs）是一類廣泛參與腫瘤發(fā)生發(fā)展且和腫瘤化療耐藥密切相關的小RNAs。本課題同時對miR-125b在卵巢癌順鉑化療耐藥中的作用及其分子機制做了初步的研究和探討。
　　 材料與方

2、法：選用人卵巢癌SKOV3細胞株進行BALB/C 裸鼠皮下成瘤，并在順鉑的化療壓力下，對皮下瘤進行連續(xù)的體內傳代移植，取第三代裸鼠腫瘤組織細胞進行原代培養(yǎng)，利用3D 培養(yǎng)球體形成實驗，CCK-8 法細胞增殖及藥物敏感性實驗等方法對該體內耐藥模型進行驗證。運用miRNA 及全基因組表達譜芯片篩選可能參與體內獲得性耐藥的miRNAs 及基因。并同時運用real time PCR的方法驗證在兩種卵巢癌順鉑耐藥配對細胞OV2008（順鉑敏感）和

3、C13*中（順鉑耐藥）miR-125b的表達差異。運用cck-8 法和流式細胞術對miR-125b和下游靶基因Bak1在順鉑敏感性中的作用進行功能性研究。利用real time PCR，western blotting和熒光素酶報告基因檢測的方法對miR-125b的預測靶基因Bak1 進行鑒定。
　　 結果：相對于其親本株SKOV3細胞，三代裸鼠腫瘤組織原代培養(yǎng)細胞SK-G3細胞球體形成能力及增殖能力增強，且對順鉑的耐藥性增加。

4、三代鼠腫瘤組織和一代對照組腫瘤組織相比，miRNA 及全基因組表達譜芯片結果顯示了存在的差異表達的miRNAs和基因。另一方面，相對于OV2008細胞，miR-125b在C13*細胞中表達上調。我們發(fā)現(xiàn)在卵巢癌細胞中上調的miR-125b 顯著抑制了順鉑誘導的細胞毒性作用。并且Bak1是miR-125b的一個確鑿的靶基因，下調Bak1的表達抑制了順鉑誘導的凋亡，導致了卵巢癌細胞順鉑耐藥性的增加。
　　 討論：我們的研究通過建立三