IGF-1R抗體抑制Herceptin耐藥卵巢癌細胞的機制研究.pdf

1、背景：卵巢惡性腫瘤是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，死亡率位列各類婦科腫瘤的首位。手術聯(lián)合化療能抑制腫瘤發(fā)展，但是復發(fā)率高。特異性抗體靶向治療已經(jīng)成為卵巢癌臨床治療的研究熱點，先后有多種抗體進入臨床研究，能夠抑制疾病進展，具有良好的應用前景。但是，抗體耐藥現(xiàn)象明顯影響了疾病預后。因此，探討卵巢癌抗體耐藥的分子機制、尋找有效的干預策略具有重要意義。在前期工作中，我們利用抗HER2抗體曲妥珠長期處理敏感細胞系SKOV3，篩選獲得一株抗體耐藥

2、的細胞株SKOV3-T。基因芯片分析結果顯示，SKOV3-T細胞中HER2表達水平降低，而IGF-1R表達顯著上調(diào)，提示耐藥細胞發(fā)生了HER2表位逃逸，而IGF-1R信號通路的激活可能與抗體耐藥相關。
　　目的：確定IGF-1R在抗體耐藥細胞系中的生物學功能，并嘗試利用抗IGF-1R特異性抗體逆轉(zhuǎn)耐藥，探索在誘導耐藥的過程中細胞發(fā)生適應性改變的內(nèi)在機制。
　　方法：利用流式細胞術、免疫印跡、細胞增殖、克隆形成、體內(nèi)成瘤等方法

3、，比較SKOV3和SKOV3-T細胞的生物學活性差異。利用真核轉(zhuǎn)染技術在 SKOV3中轉(zhuǎn)入 IGF-1R全長質(zhì)粒提高 IGF-1R表達水平，同時在 SKOV3-T中轉(zhuǎn)入 IGF-1R-siRNA慢病毒下調(diào)IGF-1R的表達，借助克隆形成、細胞增殖、體內(nèi)成瘤、細胞內(nèi)信號等實驗，驗證IGF-1R在抗HER2抗體耐藥中潛在作用。針對IGF-1R篩選獲得了一種人源單克隆抗體LMAb1，借助細胞增殖、遷移、克隆形成、體內(nèi)成瘤、信號轉(zhuǎn)導等方法探討抗

4、IGF-1R抗體對HER2耐藥的逆轉(zhuǎn)效應；進一步，我們還通過流式細胞術鑒定并分選腫瘤干樣細胞，利用細胞增殖、克隆形成、體內(nèi)成瘤以及細胞內(nèi)信號等指標，初步探索耐藥發(fā)生過程中腫瘤干細胞適應性改變的分子機制。
　　結果：HER2抗體耐藥細胞SKOV3-T的增殖、遷移、克隆形成、體內(nèi)成瘤能力均明顯強于敏感細胞SKOV3；在敏感細胞中過表達IGF-1R使得細胞增殖、克隆形成、體內(nèi)成瘤能力明顯增強，細胞周期S期延長，而在耐藥細胞中轉(zhuǎn)入IGF-

5、1R-siRNA慢病毒，降低IGF-1R表達水平，可以引起細胞增殖延緩、克隆形成和體內(nèi)成瘤能力減弱，表明IGF-1R在耐藥細胞系中具有重要的生物學作用，與耐藥細胞的增殖和成瘤能力密切相關；進一步，我們制備了IGF-1R抗體LMAb1，實驗表明，LMAb1能夠特異性的抑制SKOV3-T細胞增殖、克隆形成、遷移和體內(nèi)成瘤，提高荷瘤小鼠的生存率。細胞內(nèi)信號結果顯示，抗IGF-1R抗體能夠抑制IGF-1R活化，阻斷下游MAPK、AKT信號通路，

6、部分逆轉(zhuǎn)曲妥珠耐藥；同時，流式細胞術鑒定結果顯示，抗體耐藥細胞系中干樣細胞群比例明顯升高，分選獲得的干樣細胞增殖、克隆形成、體內(nèi)成瘤能力明顯強于非干樣細胞，提示在耐藥誘導過程中普通腫瘤細胞發(fā)生了干細胞化轉(zhuǎn)變。
　　結論：IGF-1R分子在卵巢癌抗 HER2抗體耐藥中發(fā)揮重要作用，介導耐藥細胞SKOV3-T的過度增殖、遷移、克隆形成、體內(nèi)成瘤等生物學活性；利用抗 IGF-1R抗體LMAb1特異性阻斷IGF-1R信號，能夠顯著抑制耐藥