左歸丸加減方對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞增殖和骨向分化影響的實驗研究.pdf

1、目的： 觀察左歸丸加減方對體外培養(yǎng)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(Mcscnchymal Stem Cells，MSCs)增殖和向成骨細胞分化的影響。 方法： 1.運用全骨髓法(貼壁篩選法)分離和培養(yǎng)大鼠MSCs并進行鑒定； 2.制備高中低濃度的左歸丸加減方含藥血清，用MTT法檢測左歸丸加減方含藥血清對MSCs增殖的影響，了解量效關系； 3.用不同濃度的左歸丸加減方含藥血清誘導MSCs向成骨細胞(oste

2、oblast，OB)分化，分高濃度左歸丸加減方組、中濃度左歸丸加減方組、低濃度左歸丸加減方組、經(jīng)典誘導組和空白對照組共五組； 4.用Von-Kossa染色對加入不同濃度左歸丸加減方含藥血清誘導后的細胞進行染色，確定左歸丸加減方含藥血清對MSCs是否具有成骨誘導作用； 5.運用免疫細胞化學方法檢測Ⅰ型膠原的表達，并進行灰度分析，確定左歸丸加減方含藥血清對MSCs是否具有骨向誘導分化作用。 結(jié)果： 1.MSC

3、s分離后基本貼壁，12～15d達到融合； 2.流式細胞儀檢測結(jié)果顯示，第三代MSCs中G0/G1期的細胞為96.7％，G2期的細胞為1.2％，S期的細胞為2.1％；低表達CD29，高表達CD44和CD105，不表達CD34，CD45，CD19，符合骨髓間充質(zhì)干細胞特征； 3.與空白對照組相比，不同濃度的左歸丸加減方含藥血清均能促進MSCs增殖，并且其作用呈量效依賴關系(P<0.05)； 4.加入不同濃度左歸丸加減

4、方含藥血清誘導21d后，經(jīng)Von-Kossa染色均能觀察到黑色的礦化結(jié)節(jié)； 5.與空白對照組相比，除低濃度左歸丸加減方含藥血清誘導第7d對Ⅰ型膠原平均灰度的表達沒有明顯影響外(P>0.05)，不同濃度左歸丸加減方含藥血清對Ⅰ型膠原平均灰度的表達均有上調(diào)作用(P<0.05)。 結(jié)論： 高中低濃度左歸丸加減方含藥血清均具有促進MSCs增殖的作用，并呈量效依賴關系。各濃度左歸丸加減方含藥血清均能顯著誘導其向成骨細胞(O