“人”位、動力蛙式位及傳統(tǒng)蛙式位固定對幼兔髖關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡實(shí)驗研究.pdf

1、發(fā)育性髖關(guān)節(jié)脫位或髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良(DDH)是嬰幼兒常見的小兒四肢畸形之一。新生兒發(fā)病率約3.5960,超過20％有家族史,男女發(fā)病比例約1∶3.6[1]。其治療方法多種多樣,如Pavlik吊帶、支具固定、雙下肢皮牽引、閉合復(fù)位石膏固定、手術(shù)治療等,所有方法目的都是取得頭臼同心圓復(fù)位,為了使股骨頭能很好的回歸髖臼窩從而刺激髖關(guān)節(jié)正常發(fā)育,同時也要盡可能地保證股骨頭血運(yùn)不受損壞。
　　 對于嬰幼兒DDH來說目前主要采取閉合復(fù)位石膏固

2、定治療,在我國80年代中、末期,DDH治療后的股骨頭缺血壞死(AVN)發(fā)生率很高[2],其原因與閉合復(fù)位后傳統(tǒng)蛙式位制動的應(yīng)用關(guān)系密切,后來隨著對DDH治療的研究進(jìn)展,Salter[3]提出“人”位制動,由于可降低AVN發(fā)生率己被國內(nèi)外學(xué)者廣泛接受,但其制動的穩(wěn)定性不如前者,術(shù)后再脫位的比例較高。后來人們對傳統(tǒng)蛙式位外固定進(jìn)行了許多改進(jìn),出現(xiàn)越來越多的固定方式,吉士俊[4]曾提出了動力蛙式位石膏固定,即復(fù)位后雙髖外展外旋90°屈曲110

3、°膝關(guān)節(jié)屈曲90°,用石膏固定髖關(guān)節(jié)以下踝關(guān)節(jié)以上部分肢體(髖關(guān)節(jié)和踝關(guān)節(jié)外露),該體位最大特點(diǎn)可保留髖關(guān)節(jié)的屈伸活動,增加頭臼之間相互刺激。為了探討三種固定方式不同時相對髖關(guān)節(jié)軟骨發(fā)育影響,我們模擬人類給予動物雙髖行“人”位、動力蛙式位及傳統(tǒng)蛙式位固定,從組織形態(tài)學(xué)、免疫組織化學(xué)及原位DNA斷裂標(biāo)記方面動態(tài)觀察股骨頭及髖臼關(guān)節(jié)軟骨、股骨頭骺板軟骨細(xì)胞凋亡改變,比較哪種固定方式對髖關(guān)節(jié)軟骨的發(fā)育相對有利。
　　 材料與方法：

4、r>　　 一、實(shí)驗材料
　　 普通級生后約3周齡健康日本大耳白幼兔,由中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院動物部提供。
　　 二、實(shí)驗方法
　　 (一)幼兔雙髖不同體位固定及固定不同時段對髖關(guān)節(jié)軟骨組織學(xué)觀察
　　 1、動物分組及不同體位固定
　　 將120只普通級3周齡健康日本大耳白幼兔,平均體重(0.5±0.1)kg,采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為A、B、C、D四組。每組30只。A組為“人”位固定組,B組為動

5、力蛙式位固定組,C組為傳統(tǒng)蛙式位固定組,D組為正常對照組。將A、B、C三實(shí)驗組兔分別按照各自固定的方式予以樹脂繃帶支具固定。固定方式如下:A組將幼兔雙髖外展外旋60～70°屈曲100～110°位,膝關(guān)節(jié)屈曲90°,石膏繃帶固定軀干包括腹部、腰背部以下踝關(guān)節(jié)以上部分肢體,雙髖關(guān)節(jié)穩(wěn)定,不能活動。B組將幼兔雙髖外展、外旋90°,屈曲100～110°位,膝關(guān)節(jié)屈曲90°用樹脂石膏繃帶固定髖關(guān)節(jié)以下踝關(guān)節(jié)以上部分肢體(髖關(guān)節(jié)和踝關(guān)節(jié)外露),兩小

6、腿之間木棍石膏相連接,雙髖關(guān)節(jié)可屈伸活動。C組將幼兔雙髖外展外旋90°屈曲90°位,膝關(guān)節(jié)屈曲90°,石膏繃帶固定軀干包括腹部、腰背部以下踝關(guān)節(jié)以上部分肢體,雙髖關(guān)節(jié)穩(wěn)定,不能活動。D組雙髖不予處置作為正常對照。
　　 2、HE染色觀察髖關(guān)節(jié)軟骨組織學(xué)變化。
　　 各組幼兔分別固定1周、2周、3周各處死10只。制成石蠟切片,HE常規(guī)染色,觀察股骨頭、髖臼關(guān)節(jié)軟骨及股骨頭骺板軟骨組織形態(tài)學(xué)變化。
　　 (二)應(yīng)用免

7、疫組織化學(xué)法檢測股骨頭、髖臼關(guān)節(jié)軟骨及股骨頭骺板軟骨bax、bcl-2蛋白陽性表達(dá)情況
　　 (三)應(yīng)用TUNEL法檢測不同制動方式隨時間延長軟骨細(xì)胞的凋亡變化規(guī)律。
　　 結(jié)果：
　　 一、幼兔雙髖不同體位固定及對髖關(guān)節(jié)軟骨組織學(xué)觀察
　　 (一)動物樣本
　　 實(shí)驗兔共死亡25只,追加22只,成活率82.4％,最后樣本量117,A組29只,B組30只,C組30只,D組28只。
　　 (

8、二)各體位固定不同時段對髓關(guān)節(jié)軟骨組織學(xué)觀察
　　 實(shí)驗組:固定1周時,可見三實(shí)驗組股骨頭、髖臼關(guān)節(jié)軟骨表面不光滑,較毛糙,軟骨細(xì)胞排列紊亂。固定2周時關(guān)節(jié)軟骨部分區(qū)域出現(xiàn)表層纖維形成,各層軟骨排列紊亂,細(xì)胞大小不規(guī)則,數(shù)量減少。固定3周時軟骨表層裂隙形成,附著纖維組織增厚,軟骨細(xì)胞數(shù)量進(jìn)一步減少,軟骨變薄,部分細(xì)胞核腫脹,軟骨基質(zhì)出現(xiàn)空陷窩、纖維組織增多;骺板軟骨增殖層細(xì)胞畸形、呈不典型的柱狀排列,增殖層肥大層細(xì)胞數(shù)量減少等。

9、
　　 對照組:股骨頭及髖臼關(guān)節(jié)軟骨表面均光滑,肥大層增殖層細(xì)胞成柱狀排列,整齊規(guī)則,核大小均勻,著色均勻,基質(zhì)染色淡,每個細(xì)胞柱中有4～5個軟骨細(xì)胞,細(xì)胞核扁長形,其下方約有3～5層柱狀排列的肥大軟骨細(xì)胞;骺板縱向細(xì)胞柱狀排列整齊規(guī)則,數(shù)量多,分布均勻,核呈圓形或橢圓形,大小及著色均勻,基質(zhì)染色淡,髓腔骨小梁較多呈條索狀,可見大量成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞。
　　 二、各體位固定不同時段對髖關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞bax、bcl.2陽性表

10、達(dá)的結(jié)果
　　 三實(shí)驗組bax主要陽性表達(dá)于股骨頭、髖臼關(guān)節(jié)軟骨及股骨頭骺板軟骨肥大層和增殖層區(qū)域,表達(dá)強(qiáng)度較對照組高(p＜0.05),隨固定時間延長陽性表達(dá)逐漸增強(qiáng);而bcl-2陽性表達(dá)于股骨頭、髖臼關(guān)節(jié)軟骨及股骨頭骺板軟骨全層區(qū)域,強(qiáng)度較對照組低(p＜0.05),且隨固定時間延長表達(dá)逐漸減弱。其中,對照組bcl-2/bax比值顯著高于三實(shí)驗組(p＜0.05);傳統(tǒng)蛙式位組股骨頭骺板軟骨bcl-2/bax比值顯著低于“人”位固

11、定和動力蛙式位固定組(p＜0.05)。
　　 三、各體位固定不同時段對髖關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡結(jié)果
　　 三實(shí)驗組股骨頭、髖臼關(guān)節(jié)軟骨及股骨頭骺板軟骨細(xì)胞凋亡率均較對照組高(p＜0.05),隨固定時間延長“人”位和傳統(tǒng)蛙式位固定凋亡率呈增長趨勢,凋亡細(xì)胞分布由肥大層逐漸向靜止層區(qū)域擴(kuò)散。其中,動力蛙式位組股骨頭、髖臼關(guān)節(jié)軟骨及股骨頭骺板軟骨細(xì)胞凋亡率均顯著低于“人”位和傳統(tǒng)蛙式位固定(p＜0.05)。
　　 結(jié)論：