甲狀腺乳頭狀癌淋巴結轉移的相關因素研究.pdf

1、甲狀腺癌是最常見的一類內分泌惡性腫瘤。甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)約占甲狀腺癌的80％，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢。大部分PTC經(jīng)外科手術切除、后續(xù)的I131治療和促甲狀腺激素抑制治療后，預后良好，死亡率低。但仍有部分PTC易轉移、復發(fā)，預后差。如何進一步提高此類PTC患者的生存率及生存質量，其中很重要一點是如何給予患者最佳治療方案，包括手術方案。PTC手術方案的選擇國內及國際上都存在爭議

2、。目前主要是根據(jù)不同的預后評分系統(tǒng)，將病人分為高危及低危組，給予不同手術方案。這類評分系統(tǒng)主要涉及各項臨床指標，不能精確判斷具有較高侵襲性的PTC，對手術方案的選擇指導意義有限。 隨著分子生物學、免疫學等基礎學科的發(fā)展，國內外專家學者紛紛尋找能夠顯示分化型甲狀腺癌預后的分子標記物，希望能完善或取代現(xiàn)有的預后評價系統(tǒng)?！　≌{節(jié)性T細胞(regulatoryTcell，Treg)在腫瘤的免疫抑制中起著重要作用，是腫瘤逃避免疫監(jiān)視的

3、重要機制。到目前為止，叉頭樣轉錄因子FOXP3是Tree細胞最特異的標記。應用該標記研究Treg細胞與惡性腫瘤的關系，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在許多惡性腫瘤中，Treg細胞與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉移及預后相關。FOXP3能否作為衡量PTC轉移、預后的標記，到目前為止尚未見相關報道。 BRAY突變、RET重排是PTC中最主要的分子病理機制。兩者與PTC轉移、預后之間的關系尚有爭議。 P53突變是人類腫瘤中最常見的基因突變。P53突變使得細胞

4、易于出現(xiàn)其他基因損害，因此常與一些具侵襲性行為的癌相關。β-連環(huán)蛋白(β-catenin，β-cat)是一種胞漿蛋白，是上皮鈣粘蛋白(E—cadherin，E-cad)連接細胞骨架微絲系統(tǒng)的橋梁，同時它也是Wnt信號傳導通路中的重要組成部分。它的異常表達與腫瘤失分化的進展程度密切相關。骨橋蛋白(osteopontin，OPN)是細胞外基質(Extracellular matrix，ECM)中一種重要的功能性蛋白，近年研究表明它與腫瘤細胞

5、生長、增殖、侵襲、轉移密切相關。上述三指標與PTC轉移之間的關系需要研究。 本課題主要研究Treg細胞、BRAF突變、REX重排及β-cat、P53、OPN與PTC淋巴結轉移之間的關系，同時研究上述指標與PTC各臨床因素之間的關系，以及各項指標之間是否存在聯(lián)系。 第一部分 FOXP3在PTC中的表達及與淋巴結轉移的關系研究　　Treg細胞與PTC淋巴結轉移之間是否有關聯(lián)。并分析與Treg細胞有關的臨床因素。 應

6、用實時定量熒光RT-PCR的方法分別對PTC及甲狀腺良性疾病標本及外周血的淋巴細胞中FOXP3mRNA含量進行比較；用流式細胞儀的方法檢測PTC及甲狀腺良性疾病患者外周血中FOXP3+T細胞、CD4+CD25+T細胞，用免疫組化的方法檢測PTC及甲狀腺良性疾病標本中T細胞的FOXP3蛋白表達。 結果顯示： 1.PTC的FOXP3mRNA表達量比甲狀腺良性疾病顯著性增高。 2.PTC的FOXP3+T細胞數(shù)比甲狀腺良

7、性疾病顯著性增高。 3.PTMC中FOXP3mRNA表達量較其它PTC顯著性增高。 4.PTC中FOXP3mRNA表達量與年齡和淋巴結轉移數(shù)有關。年齡越大，癌組織中FOXP3mRNA表達量越高；淋巴結轉移數(shù)越多，癌組織中FOXP3mRNA表達量越低。但在有無淋巴結轉移的PTC之間，癌組織的FOXP3mRNA表達量無顯著差異。 5.PTC與甲狀腺良性疾病患者外周血中FOXP3mRNA表達量無顯著性差異。 第

8、二部分　P53、β-cat和OPN在PTC中的表達及與淋巴結轉移的關系研究　　P53、β-cat并gOPN的表達與PTC淋巴結轉移之間的關系及與臨床各因素之間的關系。運用免疫組化的方法在PTC中檢測P53、β-cat和0PN的表達。 結果顯示： 1.有P53及β-cat異常表達比無異常表達的PTC淋巴結轉移率顯著增高。 2.有淋巴結轉移及OPN異常表達PTC的P53異常表達率顯著增高，淋巴結轉移數(shù)、FOXP3+

9、細胞數(shù)與P53異常表達顯著性正相關。 3.有淋巴結轉移PTC的B-cat異常表達率比無轉移的PTC顯著增高，淋巴結轉移數(shù)與B-cat異常表達顯著性正相關，多癌灶PTC的B-cat異常表達率顯著高于單癌灶PTC病例。 第三部分　BRAF突變及RET重排與PTC淋巴結轉移的關系　　分析BRAF突變及RET重排與淋巴結轉移及各臨床因素之間的關系?？偨Y本研究中所有可能影響PTC淋巴結轉移的因素。 用測序的方法檢測PTC

10、標本中BRAF的T1799A突變。用RT—PCR的方法檢測PTC標本中的RET／PTCI重排及RET／PTC3重排，并將出現(xiàn)目標條帶的PCR產(chǎn)物測序。 結果顯示： 1.有B-cat異常表達PTC的BRAF突變率顯著降低。 2.BRAF突變及RET重排與PTC淋巴結轉移無關 3.有P53、β-cat異常表達及多癌灶的PTC淋巴結轉移率更高，年齡<43的PTC病例更易發(fā)生淋巴結轉移。 結論：