三七總皂苷及其單體R1、Rb1、Rg1減輕HHPH的MAPK信號(hào)通路機(jī)制研究.pdf

1、本研究分為二部分：
　　第一部分:三七總皂苷減輕HHPH的臨床研究
　　目的:研究MAPKs信號(hào)通路在慢性阻塞性肺疾病(COPD)中HHPH發(fā)生發(fā)展中的作用;探討三七總皂苷防治HHPH的作用及與MAPKs信號(hào)通路的關(guān)系。
　　方法:
　　1、COPD病例(n=22)，隨機(jī)分為常規(guī)治療組(n=11)，和三七總皂苷治療組(n=11)，隨機(jī)抽取無(wú)肺疾患正常人作為對(duì)照組(n=11)。常規(guī)治療組予支氣管擴(kuò)張劑、抗生素及吸入

2、糖皮質(zhì)激素，三七總皂苷治療組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用血塞通針0.45 ivgtt qd，共治療2周，正常對(duì)照組不予任何治療措施。
　　2、分別于治療前后測(cè)定肺功能及血?dú)夥治鲋笜?biāo)一秒鐘用力呼氣容積占預(yù)計(jì)值百分比[FEVI(％Per)]、動(dòng)脈血二氧化碳分壓(PaCO2)、動(dòng)脈血氧分壓(PaO2)、肺動(dòng)脈壓力(PAP)，并抽取動(dòng)脈血2ml，按一次檢測(cè)量分裝，凍存于-20℃，使用ELISA法檢測(cè)血漿磷酸化Erk1/2及磷酸化P38MAPK蛋白

3、濃度。
　　3、對(duì)各組治療前后FEVI、PaCO2、PaO2改變和常規(guī)治療組、三七總皂苷治療組治療前后PAP、p-Erk1/2及p-P38濃度變化進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:
　　1、肺功能及血?dú)夥治鼋Y(jié)果:三七總皂苷組經(jīng)治療后病情好轉(zhuǎn)，主要表現(xiàn)為PaCO2下降(52.55±10.8，P＜0.05)，PaO2升高(58.18±8.17，P＜0.05)，PAP降低(44.64±12.78，P＜0.05);常規(guī)組部分指標(biāo)有所緩

4、解，表現(xiàn)為PaCO2降低(51.73±11.9，P＜0.05)，PaO2升高(57.27±6.53，P＜0.05)，PAP改變不明顯。兩組臨床治療效果比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。
　　2、ELISA結(jié)果:三七總皂苷組綜合治療后血漿p-ERK、p-P38表達(dá)降低（P均＜0.01）），常規(guī)組無(wú)明顯差異(P＞0.05)，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.MAPKs信號(hào)通路可能介導(dǎo)COPD患者

5、低氧高二氧化碳性肺動(dòng)脈高壓的形成;
　　2.三七總皂苷可能通過(guò)抑制P38MAPK、ERK1/2通路緩解COPD患者低氧高二氧化碳性肺動(dòng)脈高壓。
　　第二部分:三七皂苷單體R1、Rb1、Rg1減輕HHPV的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:探討三七皂苷單體R1、Rb1、Rg1減輕HHPV的作用及與MAPKs信號(hào)通路的關(guān)系。
　　方法:原代培養(yǎng)雄性SD大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(PASMCs)，采用小鼠抗大鼠-S M-actin免疫組織

6、化學(xué)SABC法染色進(jìn)行細(xì)胞鑒定，取第2至5代細(xì)胞，用無(wú)血清培養(yǎng)基饑餓24小時(shí)同步化后于低氧高二氧化碳(PO250-60mmHg，PCO255-60 mmHg)條件下繼續(xù)培養(yǎng)，并分別用低劑量(8mg/L)、中劑量(40mg/L)和高劑量(100mg/L) R1、Rb1和Rg1單獨(dú)孵育細(xì)胞24小時(shí)之后收集細(xì)胞，分別采用免疫印跡法測(cè)定Erk1/2、p38MAPK磷酸化蛋白表達(dá)，半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)檢測(cè)Erk1、Erk2、p38MAP

7、K基因水平的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.Western blot結(jié)果:
　?、俨煌瑵舛萊1干預(yù)組及對(duì)照組:p-ERK蛋白在N組表達(dá)弱，H、HD、R、RM、RH組增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);較之H組，RL、RM、RH組均減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);呈濃度梯度性，RL組＜RM組＜RH組，RL、RM、RH組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。p-p38蛋白在N組表達(dá)弱，H、HD、R、RM、RH組增強(qiáng)

8、，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);較之H組，RL、RM、RH組均減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);呈濃度依賴性，RH組＜RM組＜RL組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　?、诓煌瑵舛萊b1干預(yù)組及對(duì)照組:p-ERK蛋白在N組表達(dá)弱，H、RbL、RbM、RbH組上調(diào)(P＜0.01)，較之H組，RbL、RbM、RbH組表達(dá)減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);呈濃度依賴性，RH組＜RM組＜RL組，RbH組和RbL組之間差

9、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，RbH、RbL組均與RbM組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。p-p38表達(dá)在N組表達(dá)弱，H、RbL、RbM、RbH組上調(diào);較之H組，RbL、RbM、RbH組表達(dá)減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);呈濃度差異性，RM組＜RH組＜RL組; RbM組和RbL組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，RbM、 RbL組均與RbH之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　?、鄄煌瑵舛萊g1干預(yù)組及對(duì)照組: p-ER

10、K蛋白在N組表達(dá)不明顯，H、H D、RgL、 RgM、RgH組增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);較之H組，RgL、RgM、RgH組p-ERK表達(dá)減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）;呈濃度差異性，RM組＜RH組＜RL組;RbM組和RbL之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，RbM、RbL組均與RbH組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);p-p38蛋白在N組表達(dá)不明顯，H、HD、 RgL、RgM、RgH組增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.

11、01);較之H組，RgL、RgM、RgH組減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);呈濃度依賴性，RH組＜RM組＜RL組，RgH組、RgM組均與RgL組存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01) RgH組和RgM組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2、RT-PCR結(jié)果:
　　①R1干預(yù)組:ERK1mRNA表達(dá)在N組弱，H、HD、RM上調(diào)（P＜0.01）和RH組上調(diào)（P＜0.05），RL組上調(diào)不明顯(P＞0.05);較之H組，RL

12、、RM、RH組降低，但仍高于N組水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別＜0.01、＜0.05);呈濃度梯度性，RL組＜RM組＜RH組;各濃度組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。ERK2mRNA表達(dá)在N組不明顯，H、HD、RL、RM、RH組上調(diào)(P＜0.01）;較之H組，RL、RM、RH組ERK2mRNA表達(dá)均顯著降低，但仍高于N組水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);呈濃度梯度性，RL組＜RM組＜RH組，RL組和RH之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

13、(P＜0.01)，二者與RM組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05）。p38mRNA表達(dá)在N組較弱，H、HD、RL、RM、RH組升高(P＜0.01);較之H、HD組，R1各濃度組p38mRNA表達(dá)均明顯減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);呈濃度依賴性，RH組＜RM組＜RL組，RH組RL組和之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05），RH、RL組均與RM組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　?、赗b1干預(yù)組:ERK1 mRNAN組弱表達(dá)，H、R

14、bL組上調(diào)（P＜0.05），RM、RbH組上調(diào)不明顯（P＞0.05）;較之H組，Rb1各濃度組ERK1 mRNA表達(dá)均顯著降低，但仍高于N組水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。各濃度組之間ERK1 mRNA表達(dá)呈濃度依賴性，RbH組＜RbM組＜RbL組，各濃度組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。N組細(xì)胞ERK2mRNA表達(dá)較弱，H組、RbL組、RbM組、RbH組表達(dá)均明顯上調(diào)(P＜0.01）;較之H組、HD組，Rb1各濃度組ER

15、K2 mRNA表達(dá)均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。各濃度組之間ERK2 mRNA表達(dá)呈濃度依賴性，RbH組＜ RbM組＜RbL組，RbH和RbM兩組均與RbL組存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P分別＜0.01和＜0.05），RbH和RbM組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。p38MAPKmRNA在N組表達(dá)較弱，H組、RbL組、RbH組表達(dá)均顯著上調(diào)(P＜0.01)，RbM組上調(diào)不明顯(P＞0.05);較之H組、HD組，Rb1各濃度組p38

16、MAPKmRNA表達(dá)均明顯下調(diào)，但仍高于N組水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。各濃度組之間p38MAPKmRNA表達(dá)存在差異，RbM組＜RbH組＜ RbL組，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　③Rg1干預(yù)組:N組ERK1mRNA弱表達(dá)，H組、HD組、RgL組表達(dá)均明顯上調(diào)(P＜0.01)，RgM、RgH組上調(diào)不明顯(P＞0.05);較之H組、HD組，RgL、RgM、RgH組降低，但仍高于N組水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

17、＜0.01);有變化趨勢(shì)，RgM組＜RgH組＜RgL組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。ERK2mRNAN組表達(dá)較弱，H、HD、 RgL、RgM、RgH組增強(qiáng)(P＜0.01）;較之H、HD組，RgL、RgM、RgH組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);RgM組＜RgH組＜RgL組，RgM組和RgL之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05），RgM、 RgL均與RgH組之間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。p38MAPKmRNA在N組表達(dá)弱

18、陽(yáng)性，H、HD、 RgL、RgM組上調(diào)(P＜0.01），RgH組上調(diào)不明顯(P＞0.05）;與H、HD組比較，RgL、RgM、RgH組減弱，但仍高于N組水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);呈濃度依賴性，RgH組＜RgM組＜RgL組，RgL、 RgH組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、MAPKs信號(hào)通路可能介導(dǎo)大鼠低氧高二氧化碳性肺動(dòng)脈收縮;
　　2、三七皂苷單體R1、Rb1和Rg1均可能通