Her2靶向的小干擾RNA藥物輸送系統(tǒng)治療乳腺癌的研究.pdf

1、乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，已成為當(dāng)今女性的“第一殺手”。臨床上常用的外科手術(shù)以及放療、化療等手段均面臨諸多問(wèn)題。小干擾RNA(siRNA)藥物是近年來(lái)興起的一種新型藥物，為目前多種束手無(wú)策的疾病如乳腺癌等的治療帶來(lái)了新的曙光。然而，制約siRNA藥物發(fā)展的最關(guān)鍵因素是它的給藥系統(tǒng)，特別是發(fā)展靶向特異輸送siRNA藥物到達(dá)癌細(xì)胞和癌組織的技術(shù)；解決該問(wèn)題的關(guān)鍵是發(fā)展能克服siRNA系統(tǒng)給藥的屏障，以及將siRNA藥物特異高效輸送到

2、癌組織和癌細(xì)胞的靶向給藥系統(tǒng)。大量研究表明約有25％-30%乳腺癌患者的癌細(xì)胞表面人類(lèi)生長(zhǎng)因子受體2(humangrowthfactorreceptors2，Her2)過(guò)度表達(dá)。本論文利用Her2單鏈片段抗體既具有抗原親和活性，又具有分子小、易穿透細(xì)胞外間隙到達(dá)深部的腫瘤細(xì)胞的特點(diǎn)，構(gòu)建了Her2靶向的小干擾RNA藥物輸送系統(tǒng)，高效地將siRNA輸送到Her2陽(yáng)性乳腺癌，抑制Her2陽(yáng)性乳腺癌的生長(zhǎng)。
　　 第一部分：制備了可與

3、乳腺癌細(xì)胞表面高表達(dá)Her2受體特異性結(jié)合的Her2單鏈片段抗體融合蛋白，包括Her2單鏈片段抗體魚(yú)精多肽融合蛋白和易化學(xué)鍵合的Her2單鏈片段抗體。上述融合蛋白均在大腸桿菌中成功表達(dá)，并利用Ni-NTA與融合蛋白上的His-tag結(jié)合，得到了純度較高的目的蛋白。
　　 第二部分：利用了Her2單鏈片段抗體魚(yú)精多肽融合蛋白結(jié)合siRNA，將siRNA靶向輸送到Her2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞，并抑制了Her2陽(yáng)性乳腺癌的生長(zhǎng)。以DNMTs

4、基因?yàn)榘谢?，通過(guò)該融合蛋白靶向輸送siDNMTs到Her2陽(yáng)性的BT474細(xì)胞，有效沉默了目的基因DNMTs的表達(dá)，使抑癌基因RASSFIA的啟動(dòng)子區(qū)發(fā)生去甲基化而被再次激活，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。經(jīng)尾靜脈注射融合蛋白與siDNMTs的復(fù)合物，顯著抑制了裸鼠原位植入Her2陽(yáng)性乳腺癌的增殖。
　　 第三部分：在聚乙二醇．聚乳酸嵌段聚合物為主要材料的siRNA納米給藥系統(tǒng)的基礎(chǔ)上，通過(guò)Her2單鏈片段抗體的修飾，獲得了靶向輸送

5、siRNA到Her2陽(yáng)性乳腺癌的納米給藥系統(tǒng)，促進(jìn)了Her2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞對(duì)siRNA的攝取。經(jīng)Her2單鏈片段抗體修飾的納米給藥系統(tǒng)包載siP/K/，尾靜脈注射后，由于其納米效應(yīng)在腫瘤組織被動(dòng)富集，并進(jìn)而通過(guò)受體．配體相互作用主動(dòng)靶向腫瘤細(xì)胞，從而實(shí)現(xiàn)siRNA藥物被動(dòng)靶向和主動(dòng)靶向輸送的結(jié)合，更高效輸送siRNA藥物到Her2陽(yáng)性的乳腺癌細(xì)胞和組織，有效沉默癌基因PLK1的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡，抑制了腫瘤生長(zhǎng)，在動(dòng)物水平提高