整合素α5β1在膝骨關(guān)節(jié)炎不同退變程度關(guān)節(jié)軟骨中的差異性表達.pdf

1、目的:骨關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis，OA)是一種退行性關(guān)節(jié)疾病，主要病理表現(xiàn)為關(guān)節(jié)軟骨的退變，好發(fā)于中老年，膝關(guān)節(jié)常受累。隨著世界人口老齡化進程的加速，OA的發(fā)病率逐年上升，已成為中老年人致殘的重要原因之一，給患者帶來極大痛苦與經(jīng)濟負擔，嚴重影響患者的生活質(zhì)量。由于OA的病因與發(fā)病機制尚不清楚，目前仍是骨科領(lǐng)域研究的熱點與難點。研究發(fā)現(xiàn)，整合素(Integrin)是細胞粘附分子家族的一員，存在于細胞表面，是一種跨膜蛋白，在細胞

2、粘附與信號傳導中起著重要作用，參與細胞形態(tài)、極性、粘附、運動、生長、增殖、分化與凋亡等多種生理功能的調(diào)節(jié)。軟骨細胞可表達多種Integrins，成人軟骨細胞中主要表達Integrinα5β1。Integrinα5β1在軟骨細胞力學信號轉(zhuǎn)導、細胞增殖與分化等方面具有重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，Integrinα5β1與軟骨細胞的損傷、修復、細胞表型改變等多種軟骨病變密切相關(guān)。我們推測，Integrinα5β1在不同退變程度軟骨中可能存在差異性表達

3、，且與軟骨的退變及OA的發(fā)展相關(guān)。目前，關(guān)于Integrinα5β1在不同退變程度軟骨中的表達情況及與軟骨退變的關(guān)系缺乏相關(guān)研究。本實驗選取膝骨關(guān)節(jié)炎(Knee Osteoarthritis，KOA)患者股骨遠端負重面不同退變程度關(guān)節(jié)軟骨，檢測其中Integrinα5β1的表達，探討Integrinα5β1在KOA不同退變程度軟骨中的表達情況及與軟骨退變的關(guān)系。
　　方法:收集KOA患者全膝關(guān)節(jié)置換術(shù)股骨遠端截骨組織20例，經(jīng)大體

4、觀察，依據(jù)Outerbridge分級標準選取不同退變程度軟骨標本共40例（每例標本沿矢狀面等分成三塊，一塊用10％中性甲醛固定，另兩塊-80℃凍藏保存），將10％中性甲醛固定的標本脫鈣后制成石蠟組織塊，3μm切片后，常規(guī)HE染色及鏡下觀察，參照Bobinac分期，將標本分為三組:輕度退變組（0～6分）、中度退變組（7～9分）、重度退變組（10～14分）。采用免疫組化、Real-time PCR及Western blot檢測Integri

5、nα5β1在三組不同退變程度軟骨中mRNA與蛋白水平的表達。實驗數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差表示，統(tǒng)計分析采用SPSS17.0軟件，三組間比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果:本實驗20例KOA患者股骨遠端截骨順利，內(nèi)外髁負重面軟骨無人為損傷及污染，共選取軟骨標本40例，HE染色均勻、紅藍分明、組織結(jié)構(gòu)清晰、胞漿胞核清晰可辨、鏡下觀察與判別良好，參照Bobinac分期分成三組，輕度退變組13例、中度退變組15

6、、重度退變組12例。免疫組化染色顯示:Integrinα5β1在不同退變程度軟骨中均有表達;輕度退變組主要表達在軟骨淺表層與移形層;中度退變組除鈣化層周圍軟骨細胞未見明顯表達外，其余軟骨細胞均有表達，侵及軟骨潮線的血管內(nèi)皮細胞可見表達;重度退變組所有軟骨細胞與侵入軟骨的血管內(nèi)皮細胞均有表達。輕度退變組呈低表達，中度退變組表達增強，重度退變組表達明顯增強;免疫組化檢測結(jié)果經(jīng)Image-Pro Plus6.0軟件半定量分析，三組間比較，差異

7、性顯著(P＜0.05)。Real-time PCR與Western blot檢測顯示:Integrinα5β1的mRNA與蛋白在三組不同退變程度軟骨中均有表達，兩種方法檢測結(jié)果相同，輕度退變組呈低表達，中度退變組表達增強，重度退變組表達明顯增強;Real-time PCR與Western blot檢測結(jié)果對應(yīng)經(jīng)ABI StepOne PlusReal-time PCR System與Quantity One軟件定量分析，同種方法的三組間