氟比洛芬酯與塞來昔布治療大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎效果的比較.pdf

1、目的：為了探討FA對(duì)AA的治療效果及其作用機(jī)制，給佐劑性關(guān)節(jié)炎（adjuvant arthritis，AA）大鼠靜脈注射氟比洛芬酯注射液（flurbiprofen axetil injection，F(xiàn)A），觀察大鼠的熱縮足反射潛伏期（TWL）、關(guān)節(jié)炎指數(shù)（AI）及滑膜組織的組織學(xué)和單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）、巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-1α（MIP-1α）、Bcl-2的變化，并與灌服塞來昔布的作用相比較，為臨床治療RA提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

2、>　　 方法：將清潔級(jí)健康雄性Wistar大鼠40只，隨機(jī)分成4組，每組10只：A組為正常對(duì)照組，B組為AA模型對(duì)照組，C組為灌服塞來昔布組，D組為靜脈注射FA組。A組在大鼠右后足跖皮內(nèi)注射生理鹽水0.2ml。B、C、D三組大鼠在其相同位置注射完全弗氏佐劑（CFA，每1ml CFA含5mg高溫干燥滅活的結(jié)核桿菌）0.2ml致炎，注射后致炎側(cè)關(guān)節(jié)呈急性炎癥反應(yīng)，踝關(guān)節(jié)、足趾紅腫，18～24h達(dá)高峰，持續(xù)5天后逐漸減輕；8～10天后，大鼠

3、四肢的踝關(guān)節(jié)和足趾再次出現(xiàn)紅腫，即確定為大鼠AA模型[1]。造模成功后穩(wěn)定5天，即于造模后第15天，C組灌服塞來昔布20mg/100g，D組尾靜脈注射FA3mg/100g，B組尾靜脈注射與D組相同容量的生理鹽水，各組均連續(xù)用藥8天，每曰定時(shí)給藥一次。整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間大鼠自由飲食。
　　 分別于造模前、造模后的第3、14、18、21、24天觀察記錄各組大鼠注射側(cè)與對(duì)側(cè)足爪腫脹程度的變化，并對(duì)AI進(jìn)行評(píng)分。于造模前、造模后第1、14、1

4、7、20、24天測定大鼠的TWL。
　　 各組大鼠于造模后第24天（末次給藥后第二天）處死并取材處理，在光鏡下觀察各組大鼠踝關(guān)節(jié)滑膜組織的病理學(xué)形態(tài)改變，電鏡下觀察滑膜細(xì)胞中細(xì)胞器的改變，免疫組化染色檢測滑膜組織中MCP-1、MIP-1α、Bcl-2的表達(dá)，并應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)對(duì)結(jié)果進(jìn)行半定量分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.關(guān)節(jié)腫脹程度的測量在造模后第3天、第14天時(shí)，B、C、D三組大鼠注射側(cè)均出現(xiàn)足爪的紅腫，且顯

5、著高于A組（P<0.05）；第14天時(shí)對(duì)側(cè)腫脹顯著高于A組（P<0.05）。在造模后第15天開始給藥，B組大鼠足爪腫脹程度隨時(shí)間延長呈進(jìn)行性上升趨勢(shì)。C組大鼠注射側(cè)體積在第18天時(shí)比第14天時(shí)仍有輕微增加（P<0.05），與B組比無明顯差異（P>0.05），但在第21天、第24天時(shí)比第14天時(shí)顯著減?。≒<0.05），同時(shí)也明顯小于B組（P<0.05）；C組對(duì)側(cè)在第18天、第21天時(shí)與第14天時(shí)比無明顯差異（P>0.05），而在第24天

6、時(shí)才明顯小于第14天時(shí)（P<0.05），但在給藥后的這三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均明顯小于B組（P<0.05）。D組大鼠注射側(cè)足爪腫脹程度在第18天時(shí)不再增大，第21天、24天時(shí)已明顯小于第14天時(shí)，在這三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均明顯小于B、C兩組（P<0.05）；而對(duì)側(cè)在第18天時(shí)與C組無明顯差異（P>0.05），但明顯小于B組，第21、24天時(shí)小于B、C兩組，并且在這三個(gè)時(shí)間點(diǎn)時(shí)均明顯小于第14天時(shí)（P<0.05）。
　　 2.關(guān)節(jié)炎指數(shù)（AI）評(píng)分造模

7、后第14天，B、C、D三組關(guān)節(jié)炎癥狀均明顯，AI無顯著差異（P>0.05），B組AI隨時(shí)間延長呈進(jìn)行性上升趨勢(shì)。給藥3天后，即造模后第18天時(shí)，C、D兩組AI評(píng)分均無明顯變化，兩組間無明顯差異（P>0.05），但D組明顯低于B組（P<0.05），而在第21、24天時(shí)C、D兩組AI評(píng)分已明顯低于第14天時(shí)，同時(shí)均低于B組（P<0.05），第24天時(shí)D組已明顯低于C組（P<0.05）。
　　 3.熱縮足反射潛伏期（TWL）于造模后1

8、4天內(nèi)，B、C、D各組大鼠TWL均明顯短于A組（P<0.05）。給藥后2天內(nèi)C、D兩組TWL迅速回升，在造模后第17天時(shí)已明顯長于B組（P<0.05）。C、D兩組于造模后第20天時(shí)與B組比顯著延長（P<0.05），同時(shí)D組比C組明顯延長（P<0.05），但仍短于A組（P<0.05）。而在第24天時(shí)A、D兩組已無明顯差異（P>0.05），恢復(fù)至正常水平。
　　 4.光鏡觀察 A組滑膜細(xì)胞多呈單層，且排列規(guī)則，滑膜組織未見新生血管及

9、明顯的炎性細(xì)胞。B組大鼠關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞明顯增生，滑膜細(xì)胞層次增多可達(dá)7～11層，排列紊亂，滑膜成纖維細(xì)胞明顯增殖；滑膜組織中有大量炎性細(xì)胞浸潤，形成“淋巴樣小結(jié)”或“淋巴濾泡”；部分出現(xiàn)滑膜組織水腫，基質(zhì)淡染；滑膜血管增多，血管周圍可見大量炎性細(xì)胞浸潤，血管翳形成。C組大鼠滑膜細(xì)胞增生仍較明顯，有少量血管翳和炎細(xì)胞浸潤。D組滑膜略增厚，滑膜組織中炎性細(xì)胞明顯減少，局部滑膜有輕度增生。
　　 5.AA大鼠滑膜MCP-1、MIP-1α

10、和Bcl-2的表達(dá) A組大鼠滑膜組織僅見極少量MCP-1、MIP-1α和Bcl-2陽性表達(dá)，B組中MCP-1、MIP-1α在大鼠滑膜襯里層、襯里下層，血管周圍及滑膜成纖維細(xì)胞均有較強(qiáng)表達(dá)，Bcl-2在滑膜襯里層表達(dá)極高。C組的各項(xiàng)指標(biāo)的表達(dá)比B組明顯減少（P<0.05），但仍強(qiáng)于D組（P<0.05），而D組的表達(dá)比A組強(qiáng)（P<0.05）。
　　 6.電鏡觀察 A組滑膜細(xì)胞膜及核膜完整，核染色質(zhì)均勻、疏松；線粒體內(nèi)嵴突清晰可見；粗

11、面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)正常。B組細(xì)胞膜、核膜不完整，染色質(zhì)呈團(tuán)塊狀；線粒體顯著增多，腫脹，嵴突破壞，有嵴和膜的融合、消失；細(xì)胞內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)異常豐富并呈池狀擴(kuò)張，成群的核糖體散布于其周圍。C組可見不同程度的滑膜細(xì)胞腫脹，核染色質(zhì)密度較高；線粒體腫脹、嵴突破壞較輕；粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較豐富。D組細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)正常，核膜清晰完整，核染色質(zhì)趨于正常；線粒體腫脹輕微，嵴突完整；粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)略有擴(kuò)張，但數(shù)量減少。
　　 結(jié)論：
　　 1.大鼠右后足跖