分離富集新技術(shù)在藥物分析中的研究與應(yīng)用.pdf

1、復(fù)雜體系中痕量組分的分離分析是藥物分析工作者面臨的巨大挑戰(zhàn)。為適應(yīng)復(fù)雜體系分析，不僅需要對待測組分進行分離，還需要對痕量組分進行富集，以提高檢測靈敏度。傳統(tǒng)的樣品前處理技術(shù)通常以分離或提取待測組分為目標，且普遍存在耗時長，操作繁瑣，去除基質(zhì)不完全，靈敏度低等諸多缺點，成為制約分析效率、靈敏度和準確度的關(guān)鍵問題，尋求簡便、快速，且不降低分析靈敏度或具有富集能力的樣品前處理技術(shù)成為藥物分析領(lǐng)域的研究熱點。
　　本課題致力于分離富集新技

2、術(shù)的研究與應(yīng)用，聯(lián)合現(xiàn)代分析檢測技術(shù)，使樣品不經(jīng)處理或經(jīng)簡單處理即可進樣分析，實現(xiàn)待測組分的高靈敏度檢測，彌補傳統(tǒng)前處理方法的眾多缺點，為藥物分析提供簡便快速、靈敏準確的檢測手段。具體研究如下:
　　(1)傳統(tǒng)離心超濾技術(shù)(Centrifugal ultrafiltration，CF-UF)已普遍應(yīng)用于血漿中藥物濃度的測定，血樣僅需一步離心，即可除去血漿中的大分子內(nèi)源性物質(zhì)，所得超濾液可直接進樣分析，簡便快速。然而，該法在生物大分

3、子基質(zhì)情況下的準確度系統(tǒng)評價未見報道。課題以二甲雙胍(Metformine，MET)為模型藥物，探索影響CF-UF法和中空纖維離心超濾法(Hollow fiber centrifugal ultrafiltration，HFCF-UF)的超濾液體積的因素，比較2種超濾法測定血藥濃度的準確度，進而完善CF-UF技術(shù)的理論研究，為正確選擇和使用超濾技術(shù)提供理論依據(jù)。研究結(jié)果表明:HFCF-UF超濾液體積不受離心時間、血漿條件和凍融次數(shù)的影響

4、，HF內(nèi)腔容積可以很好的控制超濾液體積，其測定結(jié)果準確度更高。在血漿條件相近的前提下，CF-UF可通過嚴格控制離心時間來獲得適宜的超濾液體積，以保證分析結(jié)果的準確度。
　　在藥代動力學(xué)和生物等效性研究中，血藥濃度的測定是研究的關(guān)鍵，血漿樣品數(shù)量多，前處理繁瑣，耗時長，樣品前處理的工作量占全部工作的80％以上，且血漿條件差異較大，有時會影響分析結(jié)果的重現(xiàn)性，因此，建立簡便快速的前處理方法（即可縮短前處理時間，又可滿足批處理的現(xiàn)代分析

5、要求），保證分析準確度和重現(xiàn)性是分析工作者一直追求的目標。課題將HFCF-UF法成功應(yīng)用于MET人體內(nèi)藥代動力學(xué)與生物等效性試驗，獲得非常滿意的結(jié)果。該法簡單快速，重現(xiàn)性好，回收率接近100％，準確度高，為臨床血樣的快速、準確分析提供了一種新手段。
　　(2)麻黃堿(Ephedrine，EPH)和N-甲基麻黃堿(N-methylephedrine，MEPH)等藥物具有較強的生理活性，其用藥史的回顧與表征是刑偵司法實踐中的重要物證資

6、料。血樣、尿樣及毛發(fā)等往往是最常用的生物檢材，隨著藥物體內(nèi)的代謝，待測組分的濃度迅速降低，因此，提高分析方法的靈敏度，對延長檢測周期、追溯特殊人群的用藥史具有重要意義。課題建立了固相萃取-超高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用(SPE-UPLC-MS/MS)的方法，尿樣中EPH和MEPH的檢測靈敏度達到0.01 ng·mL-1，將生物檢材的檢測周期延長到7天，該法前處理簡單，靈敏度高，為生物樣品中痕量組分的檢測提供了一種新手段。
　　苯丙胺類興奮劑

7、(Amphetamine-type stimulant，ATs)，是法醫(yī)實驗室常常進行篩查和檢測的非法毒品。由于無法及時采集樣品，生物檢材中的ATs含量極低，且基質(zhì)十分復(fù)雜，往往需要對待測組分進行分離和富集。然而，傳統(tǒng)的樣品前處理方法，如蛋白沉淀法(PPT)、液液萃取法(LLE)，不足以去除生物基質(zhì)，待測組分的干擾較大，檢測靈敏度低，無法滿足復(fù)雜基質(zhì)中痕量組分的檢測要求。課題將SPE-UPLC-MS/MS技術(shù)成功應(yīng)用于全血中12種非法毒

8、品的檢測，該法采用酸洗、醇洗和堿洗3步淋洗操作，可有效去除生物基質(zhì)，基質(zhì)效應(yīng)小，測定結(jié)果準確，靈敏度高，可檢測到ppt級痕量組分，適用范圍廣，可同時檢測多種苯丙胺類毒品，為法醫(yī)毒物篩查分析提供了一種可靠、完善、靈敏的法庭物證鑒別手段。
　　(3)頂空氣相色譜法(HS-GC)是將揮發(fā)性組分從樣品基質(zhì)中有效分離后采用氣體進樣的分析技術(shù)。它在密閉空間進行，既可以避免揮發(fā)性組分的損失，又可以降低樣品基質(zhì)引起的噪音，靈敏度高，分析速度快，操

9、作簡便。然而，HS-GC技術(shù)常常需要面對頂空溶劑的選擇問題。傳統(tǒng)的頂空溶劑，例如水，沸點較低，其頂空溫度受限，不適宜于高沸點揮發(fā)性成分的頂空分析。而對于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亞砜(DMSO)等傳統(tǒng)頂空溶劑，溶劑本身的揮發(fā)性形成的分壓會抑制待測物的頂空溢出，進而影響檢測靈敏度。離子液體(Ionic liquids，ILs)作為一種新型頂空溶劑應(yīng)運而生，其本身具有獨特的理化性質(zhì)，如溶解性強，幾乎不揮發(fā)，熱穩(wěn)定性好，可設(shè)計強等

10、特點，拓展了HS-GC技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用范圍。課題建立以ILs作為項空溶劑的HS-GC法，用于十滴水中樟腦(Camphor, CPH)和桉油精(Eucalyptol，ECP)的含量測定。該法彌補了傳統(tǒng)頂空溶劑的不足，有效的將高沸點揮發(fā)性成分從復(fù)雜的中藥基質(zhì)中分離出來，避免了不揮發(fā)或難揮發(fā)性基質(zhì)組分對色譜系統(tǒng)的污染。ILs-HS-GC法為中藥制劑中高沸點揮發(fā)性成分分析提供了一種簡便快速的分析手段。與此同時，課題利用ILs較強的溶解性，