蔓性千斤拔提取工藝與質(zhì)量控制初步研究.pdf

1、目的：對蔓性千斤拔Moghania philistines藥材進(jìn)行星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法和正交設(shè)計(jì)優(yōu)化其提取工藝，為蔓性千斤拔最佳工藝參數(shù)提供試驗(yàn)依據(jù)。建立蔓性千斤拔藥材HPLC指紋圖譜和兩種異黃酮類成分含量測定，為科學(xué)評價(jià)和有效控制其質(zhì)量以及建立其規(guī)范化生產(chǎn)基地提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。對蔓性千斤拔藥材進(jìn)行揮發(fā)性成分分析。綜合提取工藝、指紋圖譜、含量測定和揮發(fā)性成分分析，為蔓性千斤拔藥材質(zhì)量控制提供參考。
　　方法：（1）以乙醇濃度、提取時(shí)間和

2、溶媒比為自變量，以染料木苷、染料木素和浸膏得率為因變量，通過對自變量的總評歸一值進(jìn)行多元線性回歸和二項(xiàng)式擬合，采用效應(yīng)面法優(yōu)化最佳的工藝條件。（2）采用高效液相色譜法，以染料木素、浸膏收率和特征峰峰面積總和作為評判指標(biāo)，通過L9(3)4正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)考察乙醇濃度、溶劑倍量、回流時(shí)間和回流次數(shù)等因素對提取工藝的影響。（3）色譜柱Ultimate XB-C8柱(5μm,250 mm×4.6 mm)，流動相為乙腈-0.1％磷酸水溶液，梯度洗脫，

3、流速1.0mL·min-1，檢測波長254 nm，柱溫35℃。（4）選擇不同產(chǎn)地的蔓性千斤拔藥材10批，用Ultimate XB-C8色譜柱(5μm,250 mm×4.6 mm)，流動相為乙腈-0.1%磷酸(0~20min,3:97;20~40min,38:62;40~80min,50:50,80~95min,100:0)，流速1.0mL·min-1，檢測波長254nm，柱溫35℃。（5）用水蒸氣蒸餾法提取蔓性千斤拔揮發(fā)油，用氣相色譜-

4、質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）對揮發(fā)性成分進(jìn)行分析，并通過峰面積歸一法計(jì)算各成分的相對百分含量。
　　結(jié)果：（1）各指標(biāo)的二項(xiàng)式擬合方程均優(yōu)于多元線性回歸方程，確定回流提取工藝條件為乙醇濃度是(X1)：60%~75%；溶媒比(X2)為24~26倍；提取時(shí)間(X3)為180~240min。（2）正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)確定最佳工藝條件為乙醇濃度為70%，料液比為24倍，提取時(shí)間為180min，提取次數(shù)是2次。（3）HPLC指紋圖譜標(biāo)定了22個(gè)共有特征

5、峰，24批次的蔓性千斤拔樣本中，絕大部分是野生品，其中，有1批樣本相似度大于0.9，13批樣本相似度大于0.8，7批樣本相似度大于0.7，因此，我們可以判斷廣西產(chǎn)的蔓性千斤拔質(zhì)量是不穩(wěn)定的。方法學(xué)考察結(jié)果表明，指紋圖譜的精密度較高，24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性較好，系統(tǒng)重現(xiàn)性良好，說明本法能有效控制蔓性千斤拔質(zhì)量，為完善其質(zhì)量評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)，且用此法提取蔓性千斤拔量化指紋特征數(shù)據(jù)穩(wěn)定、可靠。（4）染料木苷、染料木素分別0.0036~0.5400和

6、0.0056~0.8400μg內(nèi)線性關(guān)系良好，其相關(guān)系數(shù)分別為0.9993與0.9999；精密度RSD分別為2.33%和0.85%；重現(xiàn)性RSD分別為3.18%與1.84%，穩(wěn)定性RSD分別為2.31%與0.64%；加樣回收率(n=9)分別為98.9%(RSD為2.78%)和102.6%(RSD為2.81%)。（5）共提取出58個(gè)化合物，其中定性定量檢測出37個(gè)，占揮發(fā)油總量的79.61%，含量最高的是β-桉葉油醇，占10.63%。

7、r>　　結(jié)論：通過采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)選方法以及正交設(shè)計(jì)優(yōu)化的染料木苷和染料木素提取工藝,方法簡便、預(yù)測性良好。并建立了蔓性千斤拔藥材的HPLC指紋圖譜，為控制其質(zhì)量，建立規(guī)范化千斤拔藥材生產(chǎn)基地提供了試驗(yàn)依據(jù)；同時(shí)該方法操作簡便，重現(xiàn)性良好，可為蔓性千斤拔藥材的指紋圖譜評價(jià)提供依據(jù)。含量測定表明HPLC測定方法簡便，結(jié)果可靠，重現(xiàn)性較好，可作為蔓性千斤拔藥材的質(zhì)量控制方法。GC-MS測定的蔓性千斤拔揮發(fā)性成分表明，其揮發(fā)性化學(xué)成分