TAT-HaFGF經(jīng)鼻入腦的吸收特點和分子機制研究.pdf

1、目的:
　　研究TAT-HaFGF經(jīng)鼻給藥后的安全性、局部藥動學(xué)和TAT-HaFGF穿過血腦屏障的分子機制。
　　方法:
　　1、采用蟾蜍上腭離體法考察TAT-HaFGF對鼻纖毛運動和形態(tài)影響,評價其鼻腔應(yīng)用的安全性。TAT-HaFGF連續(xù)給藥五周后,通過嗅神經(jīng)標記蛋白(olfactory marker protein,OMP)和組織生理病理學(xué)變化的情況評價其長期給藥的安全性。
　　2、用放射性核素標記和共聚焦技

2、術(shù)研究TAT-HaFGF經(jīng)單次滴鼻給藥后15min、30min、45min在鼻腔、腦部、胸腺和胰腺的分布。
　　3、用小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞系(bEnd.3)建立單層血腦屏障(blood brain barrier,BBB)模型,通過Elisa、掃描電鏡、western blotting(WB)技術(shù)研究TAT-HaFGF穿過BBB的機制。
　　結(jié)果:
　　1、鼻粘膜纖毛毒性試驗表明TAT-HaFGF不影響鼻纖毛的擺動,也

3、不會使鼻纖毛脫落。鼻腔連續(xù)給予SD大鼠100/300/600μg/kg TAT-HaFGF五周,與對照組相比,OMP蛋白表達量無顯著性差異(P>0.05),組織形態(tài)無病理性改變。
　　2、SD大鼠經(jīng)滴鼻給予125I-TAT-HaFGF15min(包含滴鼻給藥所需時長12～13min)后在嗅球、小腦、腦干、垂體和血清中檢測到125I-TAT-HaFGF,給藥30min后在腦干、大腦、頸脊髓達到了峰值。給藥后30min的免疫熒光結(jié)果顯

4、示較多的TAT-HaFGF包繞于嗅神經(jīng)周圍。
　　3、BBB模型的transwell上室加入TAT-HaFGF、HaFGF、TAT,Elisa方法檢測下室中HaFGF含量,結(jié)果發(fā)現(xiàn):0~4h后TAT-HaFGF與HaFGF穿過BBB的量沒有差異,但給藥后8～16h,TAT-HaFGF穿過BBB的量明顯多于HaFGF。掃描電鏡結(jié)果顯示TAT與aFGF的物理混合組可明顯使得腦微血管內(nèi)皮細胞間隙變大。WB結(jié)果顯示,TAT-HaFGF可上

5、調(diào)MLC、CREB等Rho信號通路標志蛋白的磷酸化;HaFGF僅促進了p-CREB的表達,對p-MLC的表達沒有影響。
　　結(jié)論:
　　1、TAT-HaFGF對鼻粘膜纖毛無毒性;連續(xù)滴鼻五周對SD大鼠鼻腔整體結(jié)構(gòu)無損傷,不改變鼻粘膜結(jié)構(gòu)和嗅球上特異性嗅感覺神經(jīng)元數(shù)量。TAT-HaFGF滴鼻給藥相對安全。
　　2、TAT-HaFGF經(jīng)滴鼻給藥后可進入中樞神經(jīng)系統(tǒng),分布于大腦、小腦、腦干和垂體等部位。
　　3、體外B