miR-SNP與結(jié)直腸癌易感性及化療療效相關(guān)性研究.pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行了論述。
　　第一部分 miR-SNP與結(jié)直腸癌易感性及化療療效相關(guān)性研究
　　目的：探討microRNA相關(guān)的SNP與結(jié)直腸癌發(fā)生的易感性和腫瘤臨床病理學(xué)參數(shù)、化療療效的相關(guān)性。
　　方法：1、篩選microRNA相關(guān)的SNPs位點(diǎn),并設(shè)計(jì)等位基因特異性引物;2、收集300例健康志愿者和175例結(jié)直腸癌患者的外周血,從中提取DNA;3、采用等位基因特異性擴(kuò)增法(ASA)測(cè)定SNPs基因型;4、用統(tǒng)

2、計(jì)學(xué)軟件分析SNPs基因型與結(jié)直腸癌發(fā)生、腫瘤臨床病理學(xué)參數(shù)及化療療效的相關(guān)性。
　　結(jié)果：(1)分析6個(gè)microRNA相關(guān)的SNPs位點(diǎn)基因型的結(jié)果表明:在結(jié)直腸癌患者和健康人群中,rs2910164、rs895819、rs7911488和rs2292832的等位基因及基因型分布頻率存在顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。其中,尤以rs7911488、rs2292832與結(jié)直腸癌發(fā)生的相關(guān)性最為突出,與rs7911488位點(diǎn)AA基

3、因型相比,AG基因型(OR=0.406,95％CI=0.257-0.642)和G等位基因攜帶者(OR=0.469,95％CI=0.300-0.732)患結(jié)直腸癌的風(fēng)險(xiǎn)均更低;與 rs2292832位點(diǎn) TT基因型相比,CT基因型(OR=8.786,95％CI=5.237-14.740)和C等位基因攜帶者(OR=4.452,95％CI=2.769-7.159)患結(jié)直腸癌的風(fēng)險(xiǎn)更高。而rs3746444、rs28599926的等位基因及基因

4、型分布頻率在結(jié)直腸癌和正常人群分布中的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(2) rs3746444位點(diǎn)TT基因型和rs7911488位點(diǎn)AA基因型在低分化患者中的頻率顯著低于CT基因型(7.14％vs38.46％)和AG基因型(2.12％vs18.05％)。(3)rs7911488的基因型與化療療效反應(yīng)相關(guān)(P=0.041),與AA基因型相比,AG基因型患者(OR=0.194,95％ CI=0.045-0.842)和G等位基因攜帶者(O

5、R=0.222,95％CI=0.053-0.940)化療療效更差;rs895819位點(diǎn)的基因型與化療毒副反應(yīng)幾近相關(guān)(P=0.084),與TT基因型相比,CC基因型患者毒副反應(yīng)更大(OR=3.469,95％CI=0.860-13.989)。其余SNPs位點(diǎn)的基因型與結(jié)直腸癌化療療效和毒副反應(yīng)均未見(jiàn)顯著相關(guān)性。
　　結(jié)論：SNP位點(diǎn)rs7911488和rs2292832與結(jié)直腸癌的發(fā)生顯著相關(guān),其G等位基因和T等位基因可能對(duì)結(jié)直腸癌

6、發(fā)生起到保護(hù)作用。
　　第二部分 rs7911488對(duì)miR-1307表達(dá)水平及miR-1307對(duì)靶基因表達(dá)的影響
　　目的：研究rs7911488對(duì)miR-1307表達(dá)水平的影響和miR-1307對(duì)靶基因表達(dá)的影響。
　　方法：1、構(gòu)建(CC和TT基因型)miR-1307表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染人胚腎細(xì)胞株HEK293t,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測(cè)定不同基因型miR-1307的表達(dá);2、生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)miR-1307的靶基

7、因;3、構(gòu)建靶基因熒光素酶表達(dá)載體,將miRNA與構(gòu)建好的載體共同轉(zhuǎn)染 CHO細(xì)胞,并用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)基因活性;4、運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析 rs7911488對(duì)miR-1307表達(dá)水平的影響以及miR-1307對(duì)靶基因調(diào)控作用的影響。
　　結(jié)果：(1)rs7911488位點(diǎn)CC基因型miR-1307表達(dá)水平較位點(diǎn)TT基因型明顯上升(0.032vs0.006)。(2)預(yù)測(cè)的靶基因是RHOA、WNT4和TYMS基因。對(duì)于TYMS基

8、因,不加miR-1307的細(xì)胞,熒光素酶的活性顯著高于加入了miR-1307的細(xì)胞(P<0.05)。而對(duì)于RHOA、WNT4基因,不加miR-1307的細(xì)胞,熒光素酶的活性與加入了miR-1307的細(xì)胞無(wú)顯著差異(P>0.05)。
　　結(jié)論;rs7911488位點(diǎn)CC基因型對(duì)miR-1307的表達(dá)有促進(jìn)作用。TYMS基因表達(dá)受到miR-1307顯著抑制。
　　小結(jié):
　　本論文通過(guò)對(duì)miR-SNP與結(jié)直腸癌易感性及化療