食管鱗癌差異表達(dá)蛋白的研究.pdf

1、目的：
　　食管癌（EC）是最常見(jiàn)的高發(fā)的惡性腫瘤之一，在所有的惡性腫瘤中排在第六位。與西方國(guó)家腺癌類型為主的情況不同，食管鱗狀細(xì)胞癌（ESCC）是我國(guó)最常見(jiàn)的組織類型。近年來(lái)食管癌在基礎(chǔ)與臨床方面都進(jìn)行了大量的研究，但預(yù)后仍沒(méi)有得到很大的改善，術(shù)后五年生存率仍只有25％左右,主要原因是缺乏有效的早期診斷的生物分子標(biāo)志物和生物靶向治療。
　　食管癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多基因參與、多因素作用、多階段經(jīng)歷才最終形成的極其復(fù)雜的生物

2、學(xué)行為。先前的研究多集中在基因水平，但在DNA和RNA水平的改變并不總引起相似的蛋白的變化，也不能真實(shí)客觀的反映疾病的實(shí)際階段和演變過(guò)程。以雙向電泳及質(zhì)譜技術(shù)為基礎(chǔ)的蛋白組學(xué)，為篩選腫瘤特異性蛋白標(biāo)志物提供了一個(gè)全新的辦法。
　　本研究采用差異蛋白組學(xué)技術(shù)，通過(guò)對(duì)比研究食管鱗癌組織及配對(duì)的癌旁正常組織總蛋白表達(dá)情況，建立高分辯率及重復(fù)性好的雙向凝膠電泳圖譜，以期篩選和鑒定出與食管鱗癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)的蛋白，用于食管鱗癌的早期診斷、預(yù)后

3、評(píng)判等相關(guān)的分子標(biāo)志物，發(fā)現(xiàn)食管鱗癌生物靶向治療的新靶點(diǎn)。
　　方法：
　　選擇臨床診斷明確的10對(duì)食管鱗癌組織和正常食管組織進(jìn)行比較研究。提取總蛋白，并進(jìn)行蛋白的定量。中等精細(xì)的非線性PH3-5.6的長(zhǎng)24cm的固定pH梯度的IPG膠條進(jìn)行第一向的等電聚焦（IEF），1.25%的SDS-PAGE行第二向分離總蛋白。差異蛋白質(zhì)點(diǎn)經(jīng)Image Master2D Platinum V ersion7.0軟件分析得出后，切割、消化

4、，MALDI-ToF質(zhì)譜分析得到特異的肽質(zhì)指紋圖譜(peptide mass fingerprint，PMF)，利用PMF和蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索進(jìn)行蛋白鑒定。
　　結(jié)果：
　　1.食管鱗癌及癌旁正常組織的電泳圖平均蛋白質(zhì)點(diǎn)為834±32和802±29，平均匹配的點(diǎn)數(shù)為729±34和715±24。
　　2.食管鱗癌和癌旁正常組織圖譜分析后共有38個(gè)差異蛋白點(diǎn)，食管鱗癌組織中表達(dá)量上調(diào)的點(diǎn)有16個(gè)，在癌旁正常組織中表達(dá)量上調(diào)的