RSRC1在雌激素信號通路中的功能研究.pdf

1、雌激素信號通路由一系列復雜的信號級聯(lián)反應組成,通過雌激素與雌激素受體ERs(estrogen receptors)相結(jié)合,從而引發(fā)以及啟動含有雌激素應答元件(estrogen-responsive element, ERE)的靶基因轉(zhuǎn)錄等一系列下游事件,產(chǎn)生相應的生理學效應,如調(diào)控乳腺癌的發(fā)生發(fā)展。
　　ER包括ERα和ERβ,它們屬于甾體類核受體超家族,是配體依賴的轉(zhuǎn)錄因子。這兩個亞型均包括以下結(jié)構(gòu)域:激活功能結(jié)構(gòu)域1/2(ac

2、tivation function domain1/2,AF-1/2)、DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(DNA-binding domain,DBD)、和配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域(LBD,ligand-binding domain)。通過酵母雙雜交技術(shù)釣取了可以與ERβ結(jié)合的蛋白質(zhì)RSRC1,初步試驗表明該分子可以對雌激素信號通路發(fā)生影響。人RSRC1基因位于第三號染色體3q25區(qū)域,共編碼334個氨基酸,其理論分子量應為38.66kD。該蛋白富含精氨酸和絲氨

3、酸,并在第180-224氨基酸的區(qū)域內(nèi)能夠形成螺旋卷曲(coiled-coil)結(jié)構(gòu),故將其命名為RSRC1(arginine-serine-rich coiled-coil1)。目前對RSRC1的功能研究只有一篇文獻,認為RSRC1在RNA的組成性剪切和選擇性剪切過程中均發(fā)揮重要作用。為了對其生物學功能進行更深入的研究,在前期工作基礎(chǔ)上,對RSRC1與ERα和ERβ間的相互作用以及該相互作用對雌激素信號通路的影響進行了深入研究。

4、>　　免疫共沉淀實驗表明,RSRC1可以與ERα和ERβ結(jié)合,其中,RSRC1與ERα的結(jié)合可受到雌激素的刺激,并表現(xiàn)出對雌激素的劑量依賴,而與ERβ的結(jié)合則表現(xiàn)為雌激素的非依賴性,且將RSRC1與ERβ間相互作用位點定位于第163-196位氨基酸片段之中。
　　通過ERE-luc報告基因熒光素酶活性的測定,發(fā)現(xiàn)RSRC1以雌激素非依賴的方式特異性地增強 ERE-luc報告基因的活性,并且在乳腺癌細胞中, RSRC1能夠與ERα/

5、β以協(xié)同方式增強ERE-luc報告基因的活性。此外,我們還發(fā)現(xiàn)RSRC1是一個可以發(fā)生類泛素化(SUMO)修飾的蛋白底物,為進一步探討SUMO化修飾對RSRC1的生物學功能的影響,構(gòu)建了SUMO-1的小干擾RNA,以及一系列RSRC1的不同長度和位點的突變體,最終確定了RSRC1的SUMO化修飾位點位于第151-157位氨基酸片段之中。而RSRC1發(fā)生SUMO化修飾是其增強ERE-luc活性所必須的。
　　綜上所述,發(fā)現(xiàn)RSRC1