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1、目的:前期阿德福韋酯Ⅲ期臨床研究中發(fā)現(xiàn)HBV逆轉(zhuǎn)錄酶區(qū)多態(tài)性位點(diǎn)rtN118H及變異位點(diǎn)rtH126Y,驗(yàn)證這些位點(diǎn)是否與ADV原發(fā)性耐藥有關(guān)。
方法:通過(guò)FSR(Fragment substitution reaction)的方法,將源于耐藥患者的含有rtN118H的HBV序列,構(gòu)建到質(zhì)粒PCH9-EGFP上(PCH9-1);定點(diǎn)誘變含有HBV基因型D型的野生型質(zhì)粒PCH9-EGFP,使其含有rtN118H突變(PCH9-1
2、18)。然后將兩種方法得到的重組或誘變質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系HepG2進(jìn)行體外ADV表型耐藥分析。
結(jié)果:通過(guò)兩種方法構(gòu)建的重組質(zhì)粒都能夠成功轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞,并且都能夠在體外很好的表達(dá)HBsAg和HBeAg。含有野生型HBV序列的質(zhì)粒(PCH9-EGFP)對(duì)ADV的IC500.109±0.004μM;通過(guò)FSR構(gòu)建的含有rtN118H的誘變質(zhì)粒(PCH9-1)對(duì)ADV的IC500.112±0.001μM(P>0.05);通過(guò)定
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