雌激素對(duì)缺血性腦損傷的神經(jīng)保護(hù)和認(rèn)知修復(fù)作用的性別差異性研究.pdf

1、研究背景：
　　腦血管疾病(CVD)是神經(jīng)系統(tǒng)的常見病和多發(fā)病,嚴(yán)重威脅著人類的生命健康。缺血性腦損傷可致選擇性和遲發(fā)性的CA1區(qū)錐體神經(jīng)元凋亡,導(dǎo)致動(dòng)物和人類的認(rèn)知缺失。大部分CVD存活者遺留不同程度的認(rèn)知障礙,給社會(huì)和家庭帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)。女性在絕經(jīng)期前發(fā)生腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)較同齡男性低,但絕經(jīng)后其腦卒中的發(fā)病率與同齡男性相仿,雌激素替代療法可降低絕經(jīng)期婦女腦卒中發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn),大量基礎(chǔ)及臨床實(shí)驗(yàn)證實(shí),雌激素(E2)具有神經(jīng)保護(hù)作用。

2、>　　雌激素是一種甾體類固醇激素,由卵巢和腎上腺分泌,其神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制包括經(jīng)典的受體依賴機(jī)制和受體非依賴機(jī)制。其中,與靶器官中的雌激素受體結(jié)合是其在腦內(nèi)最主要的作用途徑,通常認(rèn)為雌激素進(jìn)入細(xì)胞后與其受體結(jié)合,受體蛋白發(fā)生構(gòu)型變化后,與DNA的性激素作用元件結(jié)合,調(diào)節(jié)相關(guān)基因表達(dá),產(chǎn)生不同效應(yīng)。在腦內(nèi),雌激素主要通過其兩種受體ERα和ERβ來(lái)發(fā)揮作用。目前認(rèn)為在雌性動(dòng)物中,雌激素主要通過腦內(nèi)的ERα受體發(fā)揮作用;而有關(guān)雌激素對(duì)雄性動(dòng)物的

3、受體作用機(jī)制目前學(xué)術(shù)界存在爭(zhēng)論。一部分學(xué)者認(rèn)為在雄性小鼠的全腦缺血模型中,ERβ受體介導(dǎo)了雌激素的神經(jīng)作用,而另一部分學(xué)者則持不同觀點(diǎn)。因此,性別因素對(duì)雌激素神經(jīng)保護(hù)作用的影響是一個(gè)值得研究的問題。
　　有實(shí)驗(yàn)表明,在全腦缺血模型中,雌激素可改善雌性大鼠的認(rèn)知功能障礙。然而,在臨床上,局灶性腦缺血的發(fā)病率要遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于全腦缺血,而且因缺血方式的差異,神經(jīng)元的凋亡路徑不同,其認(rèn)知功能結(jié)局也相差甚遠(yuǎn);再者,中風(fēng)疾病的發(fā)展預(yù)后具有性別差異性

4、,對(duì)雌性動(dòng)物有效的藥物未必能夠應(yīng)用于雄性動(dòng)物。因此,研究雌激素在局灶性腦缺血模型中的認(rèn)知保護(hù)作用及其性別差異,具有重要的理論意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　研究目的；
　　本實(shí)驗(yàn)將健康成年SD大鼠按性別配對(duì)分組,阻斷其單側(cè)大腦中動(dòng)脈后給予雌激素治療,觀察大鼠缺血后的神經(jīng)功能評(píng)分、腦梗死體積比、雌激素受體 ERα和ERβ的表達(dá)情況及行為學(xué)變化,探討雌激素的神經(jīng)保護(hù)和認(rèn)知保護(hù)作用的性別差異,并分析其可能機(jī)制。
　　研究方法：

5、r>　　1、動(dòng)物模型制備采用改良Longa法制作大腦中動(dòng)脈閉塞模型,根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要在一定的缺血時(shí)間(1.5h)后行拔線再灌注,以獲得實(shí)驗(yàn)所需的MCAO模型。
　　2、TTC染色使用TTC染色的方面結(jié)合計(jì)算機(jī)圖像分析軟件計(jì)算梗死區(qū)腦組織的面積。
　　3、免疫組織化學(xué)在形態(tài)學(xué)上觀察雌激素受體ERα和ERβ表達(dá)的部位,對(duì)蛋白表達(dá)情況進(jìn)行定性分析。
　　4、RT-PCR結(jié)合內(nèi)參相對(duì)定量分析缺血后大鼠腦內(nèi)ERα和ERβ蛋白mRNA

6、的表達(dá)。
　　5、Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)用于檢測(cè)大鼠在局灶性腦缺血后的認(rèn)知恢復(fù)狀況,評(píng)價(jià)其空間學(xué)習(xí)和空間記憶能力。
　　6、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,多組樣本均數(shù)的比較采用方差分析,兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析,以P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,雌激素對(duì)成年SD大鼠的局灶性腦缺血損傷具有神經(jīng)保護(hù)和認(rèn)知修復(fù)作用;成年雌性去卵巢大鼠腦缺血