和平散對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠藥源性損傷胃粘膜Bcl-2和Bax表達的影響.pdf

1、目的：類風濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種累及周圍關(guān)節(jié)為主的多系統(tǒng)炎癥性自身免疫性疾病，RA在其發(fā)病過程中可侵襲消化器官，而且RA治療藥物常引起胃粘膜損傷，使RA患者消化道癥狀更加明顯，成為影響RA患者長期治療的關(guān)健問題之一。本課題擬在建立佐劑性關(guān)節(jié)炎（AA）大鼠模型的基礎(chǔ)上，采用皮下注射消炎痛進一步誘導(dǎo)藥源性胃粘膜損傷的復(fù)合模型，通過檢測胃粘膜損傷指數(shù)、血清和胃粘膜組織前列腺素E2（PGE2）含量、胃

2、粘膜細胞Bcl-2、Bax表達及TUNEL法檢測胃粘膜凋亡情況，探討和平散對AA大鼠藥源性胃粘膜損傷的防治作用，為臨床用藥提供實驗依據(jù)。
　　 方法：選擇體重150-180g的Wistar大鼠，雌雄各半，于右后足跖底部皮內(nèi)注射完全弗氏佐劑（0.1ml/只），建立AA模型，另取8只大鼠同部位注射等量生理鹽水作為空白對照組。造模后第19天，將出現(xiàn)二次反應(yīng)的關(guān)節(jié)炎大鼠隨機分為模型組、復(fù)合模型組、雷尼替丁治療組、和平散治療組（根據(jù)劑量又

3、分為小劑量、中劑量、大劑量三個組），每組8只。治療各組每天灌胃給藥1次，持續(xù)14天，空白對照組、模型組（佐劑性關(guān)節(jié)炎模型組）、復(fù)合模型組分別灌胃等劑量蒸餾水，于造模前、用藥前及停藥后觀察各組大鼠一般狀態(tài)、測量體重及記錄大鼠足爪關(guān)節(jié)容積、足爪厚度，評價關(guān)節(jié)炎指數(shù)（AI），于末次灌胃結(jié)束后各組大鼠禁食不禁水24小時后，復(fù)合模型組與各治療組均皮下注射消炎痛30mg/Kg。7小時后用3％戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉大鼠，心臟采血，分離血清待測血清PG

4、E2。解剖鏡下觀察胃粘膜損傷情況并記錄胃粘膜損傷指數(shù)后，在胃腺區(qū)的相同部位切取組織塊固定、脫水、包埋、切片，HE染色觀察組織病理變化。用消毒刀片鈍性刮取其剩余胃粘膜組織保存待測。ELLSA法測定大鼠血清及胃粘膜組織PGE2，脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標記法（TUNEL）檢測細胞凋亡，采用免疫組織化學法檢測Bcl-2、Bax表達情況。
　　 統(tǒng)計學處理：所有數(shù)據(jù)均采用SPSS for windows13.0軟件包進行統(tǒng)計學

5、處理，所得結(jié)果均以X±S表示。各組間比較采用單因素方差分析。方差分析前進行方差齊性檢驗，采用LSD法進行組間兩兩比較。
　　 結(jié)果：
　　 1、建立AA大鼠及藥源性胃粘膜損傷的復(fù)合動物模型
　　 Freud's完全佐劑注射后，次日右后足即出現(xiàn)足爪腫脹，第4天腫脹達到高峰，然后逐漸減輕；第10天再次腫脹，在造模后第19天達到高峰。造模大鼠的體重、關(guān)節(jié)炎指數(shù)、足爪腫脹率與正常組比較有顯著性差異（P<0.05），證明A

6、A動物模型誘導(dǎo)成功。灌胃結(jié)束后皮下注射消炎痛，復(fù)合模型組大鼠胃粘膜表面可見點線狀出血，少數(shù)呈斑片狀，證明復(fù)合動物模型誘導(dǎo)成功。
　　 2、和平散對AA大鼠藥源性胃粘膜損傷的影響
　　 2.1和平散對AA大鼠藥源性胃粘膜損傷指數(shù)的影響
　　 和平散各劑量可明顯降低消炎痛所致AA大鼠胃粘膜損傷指數(shù)，差異有顯著性（P<0.01），和平散中劑量和雷尼替丁效果較好，小劑量次之，大劑量效果較差，考慮可能與藥物濃度過高有關(guān)。<

7、br>　　 2.2胃粘膜病理學觀察
　　 復(fù)合模型組大鼠胃粘膜上皮細胞明顯受損，脫落，上皮結(jié)構(gòu)不完整，部分粘膜中斷，局部腺體結(jié)構(gòu)紊亂，炎性細胞浸潤，粘膜血管擴張、充血，有大量紅細胞聚集。各治療組粘膜上皮受損情況、血管充血、細胞水腫程度均較復(fù)合模型組輕，其中以和平散中劑量組和雷尼替丁組最輕，小劑量組次之，大劑量組較差。
　　 3、和平散對AA大鼠藥源性損傷胃粘膜組織和血清PGE2含量的影響
　　 復(fù)合模型組與空白

8、對照組、模型組比較具有顯著性差異（P<0.05），皮下注射消炎痛可降低AA大鼠胃粘膜組織及血清中PGE2的含量；與復(fù)合模型組比較，和平散小劑量組、中劑量組和雷尼替丁組可明顯提高胃粘膜組織及血清中PGE2的含量（P<0.05），和平散小劑量組與和平散中劑量組、大劑量組比較無顯著性差異（P>0.05），和平散中劑量組與大劑量組比較有顯著性差異（P<0.05）。和平散大劑量組與復(fù)合模型組比較雖也提高了胃粘膜組織及血清中PGE2的含量，但比較無

9、顯著性差異。
　　 4、和平散對AA大鼠藥源性損傷胃粘膜Bcl-2和Bax表達及凋亡指數(shù)的影響
　　 免疫組化結(jié)果顯示：與復(fù)合模型組比較，和平散可以誘導(dǎo)Bcl-2蛋白表達增加，下調(diào)Bax蛋白表達，提高Bcl-2/Bax，比較有顯著性差異（P<0.05）；雷尼替丁組與和平散小、中劑量組比較無明顯差異（P>0.05）；和平散小劑量組與大劑量組比較無明顯差異（P>0.05）；和平散中劑量組與大劑量組比較有顯著性差異（P<0.0

10、5）。TUNEL結(jié)果顯示：復(fù)合模型組大鼠，凋亡細胞數(shù)明顯增加，和平散中劑量組AI指數(shù)明顯下降，復(fù)合模型組與和平散中劑量組比較差異有顯著性（P<0.05）。結(jié)果提示和平散能誘導(dǎo)Bcl-2表達，降低胃粘膜細胞凋亡指數(shù)，從而具有一定的抗細胞凋亡作用。
　　 結(jié)論：
　　 1、本實驗成功地建立了大鼠AA關(guān)節(jié)炎與藥源性胃粘膜損傷的復(fù)合動物模型。
　　 2、和平散可降低消炎痛致佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠胃粘膜損傷指數(shù)，具有顯著保護作用