添加不同營(yíng)養(yǎng)素的腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)對(duì)改善腦外傷大鼠腸黏膜屏障功能和多巴胺受體表達(dá)的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：（1）研究腦外傷大鼠腸黏膜多巴胺受體表達(dá)的變化，探討腸道多巴胺受體在腦外傷大鼠腸黏膜屏障功能損傷中的作用；（2）比較添加不同營(yíng)養(yǎng)素的腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)支持方式對(duì)腦外傷大鼠腸黏膜多巴胺受體表達(dá)的影響及與腸黏膜屏障功能的關(guān)系，為臨床危重癥患者營(yíng)養(yǎng)支持提供客觀的理論依據(jù)。
　　方法：采用改進(jìn)后的Feeney自由落體腦損傷裝置，造成大鼠中度腦損傷建立腦外傷大鼠模型。首先將大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、腦外傷組、多巴胺組、拮抗劑組，分別于腦外傷第3、

2、7天取腸黏膜組織、尿液、臟器組織等標(biāo)本。通過(guò)測(cè)量大鼠的體重，用尿中乳果糖和甘露醇排泄率比值(L/M)測(cè)定腸黏膜的通透性，用HE染色法觀察大鼠腸黏膜組織形態(tài)學(xué)的改變，用臟器組織中大腸桿菌菌落數(shù)測(cè)定細(xì)菌易位情況，用免疫組化方法檢測(cè)腸黏膜多巴胺受體的表達(dá)，用熒光定量PCR和western－blotting法分別檢測(cè)大鼠腸黏膜多巴胺受體表達(dá)的mRNA和蛋白水平，以此觀察腦外傷大鼠腸黏膜屏障功能和多巴胺受體表達(dá)的變化。在前期研究基礎(chǔ)上，將腦外傷大

3、鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)組、谷氨酰胺組、益生菌組、聯(lián)合組，給予營(yíng)養(yǎng)支持。分別于腦外傷第3、7天留取標(biāo)本，采用上述方法觀察添加不同營(yíng)養(yǎng)素的腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)對(duì)腦外傷大鼠腸黏膜屏障功能和多巴胺受體表達(dá)的影響。收集各組資料，主要采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差、單因素方差分析、LSD-t檢驗(yàn)、SNK-q檢驗(yàn)等進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：1．腦外傷大鼠腸黏膜屏障功能受損：（1）不同時(shí)間點(diǎn)各組大鼠尿中L/M比值存在差異（F=67.155，P<0.01；F=564.

4、713，P<0.01），腦外傷組、多巴胺組和拮抗劑組大鼠的L/M比值均高于對(duì)照組（P<0.01）；與腦外傷組相比，多巴胺組與之比較無(wú)差異（P>0.05），而拮抗劑組則較之有所降低（P<0.01）；與第3天比較，第7天對(duì)照組（t=1.152）、腦外傷組（t=0.878）和多巴胺組（t=0.780）的L/M比值無(wú)差異（P>0.05），拮抗劑組比值則下降（t=2.84，P<0.05）。（2）HE染色結(jié)果顯示：腦外傷組和多巴胺組大鼠在第3天，腸

5、黏膜絨毛完整性被破壞，絨毛間質(zhì)疏松、腸絨毛排列極不規(guī)則，絨毛上皮壞死脫落，上皮層與固有層可見(jiàn)分離；第7天，腸黏膜上皮出現(xiàn)變性萎縮，絨毛變矮，間距增寬。但拮抗劑組大鼠絨毛變化較腦外傷組和多巴胺組程度為輕，只有輕度水腫。（3）腦外傷組大鼠腸、肺、肝、脾、腎等臟器中均檢測(cè)出大腸桿菌，各組大鼠在腸、肝、脾、腎等臟器中的大腸桿菌的菌落數(shù)比較組間有差異（P<0.01）。
　　2．腦外傷大鼠腸黏膜多巴胺受體表達(dá)水平上調(diào)：（1）腦外傷組大鼠腸黏膜

6、上皮結(jié)構(gòu)破壞，可見(jiàn)大量的棕褐色陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)物，隨著時(shí)間的增加，棕褐色陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)物也有所增加；多巴胺組大鼠腸黏膜上皮結(jié)構(gòu)基本完整，但可見(jiàn)大量的棕褐色陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)物；拮抗劑組大鼠第3天腸黏膜上皮細(xì)胞可見(jiàn)大量的棕褐色陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)物，但第7天棕褐色陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)物有所減少。（2）各組大鼠腸黏膜DRD1和DRD2表達(dá)的mRNA水平的PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，腦外傷組、多巴胺組和拮抗劑組的DRD1和DRD2表達(dá)的mRNA水平均升高（P<0.01），與腦外

7、傷組相比，多巴胺組受體的表達(dá)mRNA水平無(wú)差異，拮抗劑組則較前兩組有所降低。WB檢測(cè)結(jié)果顯示，各組受體表達(dá)均較對(duì)照組上調(diào)，其中，腦外傷組和多巴胺組表達(dá)DRD1和DRD2的條帶亮度無(wú)明顯差別，拮抗劑組條帶亮度則有差異。
　　3．添加不同營(yíng)養(yǎng)素的腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)方式有助于改善腦外傷大鼠腸黏膜屏障功能：（1）腦外傷后各組大鼠體重均有不同程度的降低（P<0.05），但各組間大鼠體重存在差異（F=6.30，P<0.01），與對(duì)照組比較，添加不同營(yíng)養(yǎng)

8、素的腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)組大鼠的體重均有所增加（P<0.01）。（2）腦外傷第7天，各組大鼠腸黏膜L/M比值存在差異（F=432.472，P<0.01），添加了不同營(yíng)養(yǎng)素的腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)組大鼠腸黏膜L/M比值均較對(duì)照組有所降低，其中益生菌組大鼠L/M比值要低于其他營(yíng)養(yǎng)組（P<0.05）。（3）HE染色結(jié)果顯示，添加了不同營(yíng)養(yǎng)素的各組大鼠較腦外傷組的病理?yè)p傷均有不同程度的減輕。（4）腦外傷第7天各組大鼠腸、肺、肝、脾、腎等臟器中均檢測(cè)出大腸桿菌，在腸、肺、

9、脾、腎等臟器，各組大腸桿菌數(shù)比較組間有差異，均少于對(duì)照組（P<0.05），益生菌組和聯(lián)合組檢測(cè)出在腸道的菌落數(shù)要少于腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)組和谷氨酰胺組（P<0.01）。
　　4．添加不同營(yíng)養(yǎng)素的腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)方式可使腸黏膜多巴胺受體表達(dá)水平下調(diào)：（1）腦外傷第7天，各營(yíng)養(yǎng)組大鼠腸組織棕褐色陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)物有所減少。（2）各組大鼠腸黏膜DRD1和DRD2表達(dá)的mRNA水平的PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，各營(yíng)養(yǎng)組的DRD1和DRD2表達(dá)的mRNA水平均下降

10、（P<0.01）；各營(yíng)養(yǎng)組的DRD1表達(dá)mRNA水平無(wú)明顯差異；益生菌組和聯(lián)合組大鼠腸黏膜的DRD2表達(dá)mRNA水平較腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)組和谷氨酰胺組有所下降（P<0.01）。WB檢測(cè)結(jié)果顯示，各組受體表達(dá)均較對(duì)照組下調(diào)，表達(dá)DRD1和DRD2的條帶亮度無(wú)明顯差別。
　　結(jié)論：（1）腦外傷可導(dǎo)致大鼠腸黏膜通透性明顯升高，腸黏膜上皮細(xì)胞受損、細(xì)胞間緊密連接增寬等組織形態(tài)學(xué)的改變，以及發(fā)生臟器組織細(xì)菌易位等現(xiàn)象，表明腦外傷大鼠腸黏膜屏障功能受損

11、。（2）腦外傷大鼠腸道多巴胺受體的表達(dá)水平增加，說(shuō)明腦外傷大鼠腸黏膜屏障功能受損可能與腸道多巴胺受體表達(dá)水平的上調(diào)有關(guān)。（3）添加不同營(yíng)養(yǎng)素的腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)能夠減緩腦外傷大鼠體重的下降趨勢(shì)，阻止腦外傷大鼠腸黏膜通透性的增加，減輕腦外傷大鼠腸黏膜組織形態(tài)的損傷，對(duì)腦外傷大鼠腸黏膜屏障具有保護(hù)作用，有助于減少腸道細(xì)菌易位的發(fā)生。添加不同營(yíng)養(yǎng)素的腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)在減緩腦外傷大鼠體重下降趨勢(shì)以及維護(hù)腸黏膜屏障功能方面各有優(yōu)勢(shì)，這可能與不同營(yíng)養(yǎng)素對(duì)改善腸黏膜屏