心肌β-,1--腎上腺素受體及M-,2-—乙酰膽堿能受體在心肌頓抑中的動(dòng)態(tài)表達(dá).pdf

1、研究背景：心肌頓抑(Myocardial Stunning，MS)又稱(chēng)缺血后心肌功能障礙，是指心肌短時(shí)缺血尚不足以造成心肌壞死，但再灌注后恢復(fù)正?；蚪咏５难骱笃錂C(jī)械功能障礙卻需數(shù)小時(shí)、數(shù)天甚至數(shù)周才能完全恢復(fù)的病理過(guò)程。心肌頓抑現(xiàn)象普遍存在于臨床中，是左心功能不全發(fā)生率和病死率增加的原因之一。大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床研究表明，心肌頓抑已經(jīng)構(gòu)成了臨床心臟直視手術(shù)及心臟移植術(shù)后常見(jiàn)的心功能障礙發(fā)生的主要病理生理基礎(chǔ)，成為近年來(lái)臨床心臟外科

2、治療過(guò)程中常見(jiàn)的問(wèn)題。體外循環(huán)使血液內(nèi)兒茶酚胺、血管緊張素、血管加壓素增加，周身血管張力增加，肌絲對(duì)Ca2+敏感性降低，大量的正性肌力藥只能增加心肌ATP(三磷酸腺苷)的耗竭，不利于ATP的儲(chǔ)存，易使心肌的損傷向不可逆的方向發(fā)展。目前，在心肌頓抑眾多發(fā)生機(jī)制假說(shuō)中，“氧自由基”和“鈣超載”理論是最為主要的兩個(gè)，但是對(duì)于它的確切發(fā)病機(jī)制仍沒(méi)有定論。國(guó)內(nèi)外許多的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，在心肌組織中存在多種受體系統(tǒng)，如β-腎上腺素能受體、M-乙酰膽堿能

3、受體、血管緊張素受體、腺苷受體等受體系統(tǒng)。心肌上的這些受體均是參與調(diào)節(jié)心臟活動(dòng)的受體，它們主要是通過(guò)心肌細(xì)胞膜上的信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)發(fā)揮其對(duì)心臟活動(dòng)的調(diào)節(jié)，對(duì)正常心功能的維持起著重要的作用。然而，對(duì)于心臟受體系統(tǒng)的數(shù)量和功能在心肌頓抑的病理生理過(guò)程中的變化方式以及受體間相互調(diào)節(jié)的機(jī)制，國(guó)內(nèi)外關(guān)于此方面的研究很少。隨著分子生物學(xué)和藥理學(xué)的深入研究，為認(rèn)識(shí)受體對(duì)缺血性心臟病的作用機(jī)制提供了研究平臺(tái)。 目的：本實(shí)驗(yàn)分別在細(xì)胞和基因水平觀察頓

4、抑心肌的受體的變化，對(duì)心肌細(xì)胞膜上受體的生理功能及其在心肌頓抑狀態(tài)下的動(dòng)態(tài)表達(dá)進(jìn)行研究，旨在為闡明MS發(fā)生機(jī)制提供一種全新的研究途徑，同時(shí)為進(jìn)行探索性研究心肌頓抑時(shí)受體的調(diào)節(jié)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的機(jī)制、藥物干預(yù)后心肌功能的變化等提供研究模型。 方法：第一部分：構(gòu)建大鼠心肌頓抑模型，并進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)。健康成年雄性SD大鼠48只，隨機(jī)分成對(duì)照組和手術(shù)組：手術(shù)組對(duì)冠狀動(dòng)脈左前降支進(jìn)行阻斷15 min，按缺血后再灌注時(shí)間的不同分為5組：①再灌注后1

5、小時(shí)組；②再灌注后4小時(shí)組：③再灌注后8小組；④再灌注后24小組；⑤再灌注后72小時(shí)組。陰性對(duì)照組不進(jìn)行左冠狀動(dòng)脈前降支阻斷。麻醉實(shí)驗(yàn)SD大鼠，通過(guò)胸骨左緣第4肋間開(kāi)胸，暴露心臟，以帶針滑線縫取冠狀動(dòng)脈左前降支，收緊滑線進(jìn)行阻斷，松開(kāi)即恢復(fù)灌注，建立MS模型。全程監(jiān)測(cè)心電圖，并進(jìn)行保存。第二部分：β1-腎上腺素受體及M2-乙酰膽堿能受體的檢測(cè)。采用免疫組織化學(xué)法及RT-PCR(逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng))法對(duì)頓抑區(qū)心室肌組織進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)對(duì)不同

6、組別心肌組織中兩種蛋白的表達(dá)情況的半定量分析，觀察β1-腎上腺素受體及M2-乙酰膽堿能受體在心肌頓抑時(shí)的變化規(guī)律。 結(jié)果：(1)以左心室前壁紫紺及同步心電圖示S-T段抬高，QRS波幅度升高為阻斷成功標(biāo)志。復(fù)灌時(shí)左室前壁缺血區(qū)紫紺消失，同步心電圖示S-T段、QRS波回落至正常。對(duì)頓抑區(qū)心室肌進(jìn)行組織學(xué)檢查蘇木素-伊紅(HE)染色：對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組大鼠心臟在光鏡下心肌組織無(wú)差異，均為正常心肌結(jié)構(gòu)。由此可以判定SD大鼠MS模型制作成功。

7、(2)阻斷SD大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支15分鐘恢復(fù)再灌注后，β1-AR表達(dá)水平與再灌注時(shí)間有依賴(lài)關(guān)系：于再灌注1小時(shí)急劇升高，并達(dá)到高峰，與對(duì)照組及其他手術(shù)組相比，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)：之后逐漸降低，72小時(shí)后恢復(fù)到正常水平。M2-AChR表達(dá)水平在再灌注4小時(shí)降至最低，與對(duì)照組及其他手術(shù)組相比，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，之后逐漸升高；至再灌注8小時(shí)達(dá)高峰，與對(duì)照組和再灌注1、4小時(shí)組相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)