心肌β-,1--腎上腺素受體及M-,2-—乙酰膽堿能受體在心肌頓抑中的動(dòng)態(tài)表達(dá).pdf

1、研究背景：心肌頓抑(Myocardial Stunning，MS)又稱缺血后心肌功能障礙，是指心肌短時(shí)缺血尚不足以造成心肌壞死，但再灌注后恢復(fù)正?；蚪咏５难骱笃錂C(jī)械功能障礙卻需數(shù)小時(shí)、數(shù)天甚至數(shù)周才能完全恢復(fù)的病理過程。心肌頓抑現(xiàn)象普遍存在于臨床中，是左心功能不全發(fā)生率和病死率增加的原因之一。大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床研究表明，心肌頓抑已經(jīng)構(gòu)成了臨床心臟直視手術(shù)及心臟移植術(shù)后常見的心功能障礙發(fā)生的主要病理生理基礎(chǔ)，成為近年來臨床心臟外科

2、治療過程中常見的問題。體外循環(huán)使血液內(nèi)兒茶酚胺、血管緊張素、血管加壓素增加，周身血管張力增加，肌絲對(duì)Ca2+敏感性降低，大量的正性肌力藥只能增加心肌ATP(三磷酸腺苷)的耗竭，不利于ATP的儲(chǔ)存，易使心肌的損傷向不可逆的方向發(fā)展。目前，在心肌頓抑眾多發(fā)生機(jī)制假說中，“氧自由基”和“鈣超載”理論是最為主要的兩個(gè)，但是對(duì)于它的確切發(fā)病機(jī)制仍沒有定論。國(guó)內(nèi)外許多的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，在心肌組織中存在多種受體系統(tǒng)，如β-腎上腺素能受體、M-乙酰膽堿能

3、受體、血管緊張素受體、腺苷受體等受體系統(tǒng)。心肌上的這些受體均是參與調(diào)節(jié)心臟活動(dòng)的受體，它們主要是通過心肌細(xì)胞膜上的信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)發(fā)揮其對(duì)心臟活動(dòng)的調(diào)節(jié)，對(duì)正常心功能的維持起著重要的作用。然而，對(duì)于心臟受體系統(tǒng)的數(shù)量和功能在心肌頓抑的病理生理過程中的變化方式以及受體間相互調(diào)節(jié)的機(jī)制，國(guó)內(nèi)外關(guān)于此方面的研究很少。隨著分子生物學(xué)和藥理學(xué)的深入研究，為認(rèn)識(shí)受體對(duì)缺血性心臟病的作用機(jī)制提供了研究平臺(tái)。 目的：本實(shí)驗(yàn)分別在細(xì)胞和基因水平觀察頓

4、抑心肌的受體的變化，對(duì)心肌細(xì)胞膜上受體的生理功能及其在心肌頓抑狀態(tài)下的動(dòng)態(tài)表達(dá)進(jìn)行研究，旨在為闡明MS發(fā)生機(jī)制提供一種全新的研究途徑，同時(shí)為進(jìn)行探索性研究心肌頓抑時(shí)受體的調(diào)節(jié)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的機(jī)制、藥物干預(yù)后心肌功能的變化等提供研究模型。 方法：第一部分：構(gòu)建大鼠心肌頓抑模型，并進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)。健康成年雄性SD大鼠48只，隨機(jī)分成對(duì)照組和手術(shù)組：手術(shù)組對(duì)冠狀動(dòng)脈左前降支進(jìn)行阻斷15 min，按缺血后再灌注時(shí)間的不同分為5組：①再灌注后1

5、小時(shí)組；②再灌注后4小時(shí)組：③再灌注后8小組；④再灌注后24小組；⑤再灌注后72小時(shí)組。陰性對(duì)照組不進(jìn)行左冠狀動(dòng)脈前降支阻斷。麻醉實(shí)驗(yàn)SD大鼠，通過胸骨左緣第4肋間開胸，暴露心臟，以帶針滑線縫取冠狀動(dòng)脈左前降支，收緊滑線進(jìn)行阻斷，松開即恢復(fù)灌注，建立MS模型。全程監(jiān)測(cè)心電圖，并進(jìn)行保存。第二部分：β1-腎上腺素受體及M2-乙酰膽堿能受體的檢測(cè)。采用免疫組織化學(xué)法及RT-PCR(逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng))法對(duì)頓抑區(qū)心室肌組織進(jìn)行檢測(cè)，通過對(duì)不同

6、組別心肌組織中兩種蛋白的表達(dá)情況的半定量分析，觀察β1-腎上腺素受體及M2-乙酰膽堿能受體在心肌頓抑時(shí)的變化規(guī)律。 結(jié)果：(1)以左心室前壁紫紺及同步心電圖示S-T段抬高，QRS波幅度升高為阻斷成功標(biāo)志。復(fù)灌時(shí)左室前壁缺血區(qū)紫紺消失，同步心電圖示S-T段、QRS波回落至正常。對(duì)頓抑區(qū)心室肌進(jìn)行組織學(xué)檢查蘇木素-伊紅(HE)染色：對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組大鼠心臟在光鏡下心肌組織無差異，均為正常心肌結(jié)構(gòu)。由此可以判定SD大鼠MS模型制作成功。

7、(2)阻斷SD大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支15分鐘恢復(fù)再灌注后，β1-AR表達(dá)水平與再灌注時(shí)間有依賴關(guān)系：于再灌注1小時(shí)急劇升高，并達(dá)到高峰，與對(duì)照組及其他手術(shù)組相比，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)：之后逐漸降低，72小時(shí)后恢復(fù)到正常水平。M2-AChR表達(dá)水平在再灌注4小時(shí)降至最低，與對(duì)照組及其他手術(shù)組相比，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，之后逐漸升高；至再灌注8小時(shí)達(dá)高峰，與對(duì)照組和再灌注1、4小時(shí)組相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)