PCOS大鼠模型卵巢中PPARγ、M2型巨噬細(xì)胞和FGL2的表達(dá)與胰島素抵抗的關(guān)系.pdf

1、目的:
　　1.探討DHEA和來(lái)曲唑構(gòu)建雌性Wistar大鼠多囊卵巢綜合征（PCOS）兩種動(dòng)物模型的內(nèi)分泌及胰島素抵抗特征，以及卵巢形態(tài)學(xué)變化。
　　2.探討DHEA和來(lái)曲唑大鼠PCOS兩種模型卵巢組織中PPARγ和FGL2的表達(dá)、M2型巨噬細(xì)胞的分布及與胰島素抵抗的關(guān)系，闡明胰島素抵抗和慢性炎癥在PCOS發(fā)生發(fā)展過(guò)程中可能存在的作用。
　　方法:
　　1. DHEA造模：選取21日齡的SPF級(jí)雌性Wistar大

2、鼠20只，隨機(jī)分為模型組（P組）和對(duì)照組（C組），每組各10只，于23日齡時(shí)開(kāi)始給藥。P組每日大鼠給予DHEA6 mg/100 g體重+0.2 ml注射用無(wú)菌大豆油劑，連續(xù)皮下注射21 d；C組給予每日注射用大豆油劑0.2 ml，連續(xù)皮下注射21 d。兩組均從用藥后的第10天開(kāi)始每日行陰道涂片檢查直到用藥期終止。
　　2.來(lái)曲唑造模：選取38日齡的SPF級(jí)雌性Wistar大鼠20只，隨機(jī)分為模型組（L組）和對(duì)照組（D組），模型組1

3、2只，對(duì)照組8只。于6周齡時(shí)開(kāi)始給藥，L組將來(lái)曲唑1 mg/kg·d溶于1％羧甲基纖維素鈉（CMC）中，連續(xù)灌胃21 d；D組正常飼養(yǎng)。兩組從用藥的第10 d開(kāi)始行陰道涂片檢查直至用藥期結(jié)束。
　　3.以上兩模型組及相應(yīng)的兩對(duì)照組均于用藥期最后一次給藥結(jié)束24 h（同時(shí)禁食12 h）后開(kāi)始處理。稱體重，血糖儀測(cè)FBG，水合氯醛麻醉后，腹主動(dòng)脈采血，剝離卵巢，大鼠處死。分離血清，電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè) T、E2，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA

4、）檢測(cè)FINS。卵巢稱重，組織石蠟包埋，連續(xù)切片，蘇木精-伊紅染色（HE）觀察卵巢形態(tài)并拍照存圖，
　　4.免疫組織化學(xué)染色觀察炎癥指標(biāo) Fgl2、PPARγ、M2型巨噬細(xì)胞差異表達(dá)并拍照存圖。每組選取5只大鼠左側(cè)卵巢切片的5張照片，使用Image-Pro Plus6.0軟件進(jìn)行平均光密度分析。
　　結(jié)果:
　　1.體重兩組模型組與對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.陰道涂片 DHEA模型組的大鼠動(dòng)情周期于第

5、10天開(kāi)始失去動(dòng)情周期變化，全部處于動(dòng)情期直至用藥結(jié)束；來(lái)曲唑模型組大鼠于第6天開(kāi)始逐漸失去動(dòng)情周期變化，全部都處于動(dòng)情間期直至用藥結(jié)束。兩模型組對(duì)照組則呈現(xiàn)規(guī)律的動(dòng)情周期變化。
　　3.卵巢形態(tài)變化，DHEA模型組鏡下可見(jiàn)卵巢有較多閉鎖卵泡，囊狀擴(kuò)張卵泡比例明顯增加，卵巢少見(jiàn)黃體形成；來(lái)曲唑組大鼠卵巢鏡下可見(jiàn)較多囊狀擴(kuò)張卵泡，卵泡內(nèi)卵母細(xì)胞和放射冠消失，顆粒細(xì)胞層及黃體明顯減少，還可見(jiàn)較多閉鎖卵泡，卵泡膜細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞增生。兩模

6、型組的對(duì)照組均可見(jiàn)發(fā)育不同階段的卵泡，卵泡內(nèi)可見(jiàn)卵母細(xì)胞，顆粒細(xì)胞呈多層，還可見(jiàn)較多黃體。
　　4.血液指標(biāo)，DHEA組T、FINS、HOMA-IR均較對(duì)照組明顯升高；來(lái)曲唑組T值較對(duì)照組明顯升高，其余FGB、FINS、HOMA-IR與對(duì)照組比較無(wú)明顯差異。
　　5.炎癥指標(biāo)，PPARγ表達(dá)量：P組明顯低于C組，L組與D組無(wú)明顯差異，C組與D組無(wú)明顯差異，P組明顯低于L組；巨噬細(xì)胞M2表型表達(dá)量：P組明顯低于C組，L組與D組

7、無(wú)明顯差異，C組與D組無(wú)明顯差異，P組明顯低于L組；Fgl2表達(dá)量：P組明顯高于C組，L組與D組無(wú)明顯差異，C組與D組無(wú)明顯差異，P組明顯高于L組。
　　結(jié)論:
　　1. DHEA誘導(dǎo)的PCOS模型大鼠和來(lái)曲唑誘導(dǎo)的模型大鼠，卵巢病理改變及血液激素改變與PCOS患者相似。代謝方面，DHEA組伴有IR，來(lái)曲唑組未提示伴有IR及其相關(guān)的改變征象。DHEA造?？梢源龠M(jìn)PCOS伴IR的發(fā)生。
　　2.在DHEA的PCOS模型疾