Pax4協(xié)同Pdx1、MafA、Ngn3促進(jìn)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向胰島素陽(yáng)性細(xì)胞的分化.pdf

1、【目的】采用基因重編程的方法探討體外條件下轉(zhuǎn)錄因子Pax4對(duì)Pdx1、MafA及Ngn3共同體誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HuMSCs)向胰島素陽(yáng)性細(xì)胞分化的協(xié)同作用及可能機(jī)制,以獲取足夠用于移植的胰島素陽(yáng)性細(xì)胞。
　　【材料與方法】采用差異貼壁法分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增出人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,用構(gòu)建的含Pdx1、MafA及Ngn3三基因重組腺病毒載體(Ad

2、-3F)和Ad-Pxa4腺病毒載體分別及聯(lián)合誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,細(xì)胞免疫組織化學(xué)法檢測(cè)誘導(dǎo)后細(xì)胞中胰島素、胰高血糖素及C-肽的表達(dá);qRT-PCR檢測(cè)誘導(dǎo)后細(xì)胞中GCG和胰島素基因及多種相關(guān)內(nèi)源性因子的表達(dá)情況;ELISA方法檢測(cè)誘導(dǎo)后細(xì)胞對(duì)葡萄糖刺激的敏感性程度及分泌胰島素量的情況。
　　【結(jié)果】
　?、偌?xì)胞免疫組織化學(xué)法檢測(cè)結(jié)果表明在Pax4因子的協(xié)同作用下,誘導(dǎo)4天后的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)胰島素、胰高血糖素素及C

3、-肽量均增加。
　?、趒RT-PCR結(jié)果表明病毒的感染復(fù)數(shù)為50時(shí),4個(gè)轉(zhuǎn)錄因子共同誘導(dǎo)的細(xì)胞胰高血糖素基因表達(dá)較Ad-3F誘導(dǎo)的細(xì)胞胰高血糖素基因表達(dá)有下降且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　③在Pax4因子協(xié)同作用下誘導(dǎo)后的細(xì)胞表達(dá)β細(xì)胞成熟過(guò)程的重要內(nèi)源性轉(zhuǎn)錄因子,且表達(dá)得到上調(diào)。
　?、芨邼舛绕咸烟谴碳は?Pax4協(xié)同下誘導(dǎo)的細(xì)胞分泌胰島素量較Ad-3F誘導(dǎo)的細(xì)胞分泌量增加,且有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)