CTGF和HIF-1α在慢性馬兜鈴酸腎病大鼠腎小管間質(zhì)的表達.pdf

1、目的： 1．制作慢性馬兜鈴酸腎病(Chronic aristolochic acid nephrology，CAAN)大鼠模型，觀察CAAN大鼠腎臟組織形態(tài)改變。 2．動態(tài)觀察CAAN大鼠腎小管間質(zhì)中轉(zhuǎn)化生長因子-β1(Transforming growth factor-β1，TGF-β1)、結(jié)締組織生長因子(Connective tissue growth factor，CTGF)、缺氧誘導(dǎo)因子-1α(Hypoxia

2、 inducible factor-1α，HIF-1α)和纖維連接蛋白(Fibronectin，F(xiàn)N)的表達情況，探討它們與CAAN大鼠腎間質(zhì)纖維化的關(guān)系。 方法： 1．36只Wistar大鼠分2組：①模型組(n=24)，給予關(guān)木通水煎劑連續(xù)灌胃12周建立CAAN大鼠動物模型；②對照組(n=12)，給予等量自來水連續(xù)灌胃12周；在4、8、12、16周末分別處死模型組6只、對照組3只，留取腎組織。 2．大鼠腎臟組織

3、常規(guī)HE、Masson染色，光鏡下觀察CAAN組織形態(tài)改變并測定腎間質(zhì)相對面積評價腎間質(zhì)纖維化程度。免疫組化觀察TGF-β1、CTGF、HIF-1α、VEGF和FN的表達，并行半定量分析檢測表達量。 3．統(tǒng)計學(xué)處理：采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。計量資料用x±s表示，組間差異比較采用t檢驗；相關(guān)性檢驗采用Pearson相關(guān)分析。 結(jié)果： 1．大鼠腎組織形態(tài)改變：對照組各大鼠腎小管間質(zhì)基本正常，各時間點腎間質(zhì)相對面

4、積分別為0.0639±0.0031、0.0651±0.0029、0.0660±0.0025、0.0700±0.0040。模型組在4周末，小管上皮細胞腫脹，個別上皮細胞壞死脫落，可見核固縮，間質(zhì)少量炎癥細胞浸潤。8周末，部分腎小管上皮萎縮、扁平、刷狀緣消失，腎間質(zhì)面積增寬，炎癥細胞小灶狀浸潤。12周末，腎小管多灶狀萎縮或消失，管腔擴大，間質(zhì)明顯纖維化，少量炎癥細胞浸潤。16周末，腎小管大片萎縮、消失，呈現(xiàn)寡細胞性腎間質(zhì)纖維化。各時間點腎間

5、質(zhì)相對面積分別為0.0701±0.0069、0.1000±0.0166、0.1667±0.0201、0.3472±0.0355。 2．大鼠腎組織免疫組化染色結(jié)果：對照組TGF-β1僅有少量表達于腎小管上皮細胞胞漿，CTGF、FN幾乎不見表達，HIF-1α在皮髓質(zhì)交界處的腎小管上皮細胞有少量表達，VEGF廣泛表達在腎小管上皮細胞胞漿。模型組TGF-β1表達在腎小管上皮細胞胞漿及間質(zhì)成纖維細胞、炎性浸潤的單個核細胞；早期表達逐漸增多

6、，8周末最為顯著(P<0.01)，此后呈下降趨勢，但仍高于同期對照組(P<0.01)。光鏡下觀察可見，在12周和16周末關(guān)木通組大鼠的同一切片中，越是扁平、萎縮、細胞融合等晚期慢性病變明顯的小管上皮，表達TGF-β1陽性顆粒越少。CTGF、HIF-1α、FN表達在腎小管上皮、間質(zhì)成纖維細胞和少量浸潤的炎癥細胞，隨著時間的延長病變進展，表達量顯著增多(P<0.01)，尤其是病變明顯的變性萎縮上皮細胞陽性顆粒表達更多。VEGF持續(xù)廣泛表達在

7、腎小管上皮細胞胞漿和間質(zhì)細胞，與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 3．相關(guān)性分析：實驗組大鼠腎小管間質(zhì)CTGF、HIF-1α、FN表達量和腎間質(zhì)相對面積兩兩正相關(guān)：CTGF和HIF-1α r=0.980，CTGF和FN表達量r=0.963,CTGF和腎間質(zhì)相對面積r=0.966，HIF-1α和FN r=0.958，HIF-1α和腎間質(zhì)相對面積r=0.971，F(xiàn)N表達量和腎間質(zhì)相對面積r=0.961，以上均有P<0.01。 結(jié)