脂肪細(xì)胞共培養(yǎng)及白介素-6、抵抗素對(duì)HepG2細(xì)胞ABCA1表達(dá)的影響及可能機(jī)制探討.pdf

1、背景：
　　肥胖尤其是腹型肥胖是代謝綜合征的重要組成部分，并常伴有高密度脂蛋白膽固醇水平明顯減低。脂肪組織作為重要的內(nèi)分泌器官在肥胖時(shí)分泌異常的脂肪因子如白細(xì)胞介素-6(IL-6)、抵抗素(Resistin)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等。HDL主要在肝臟合成，其中三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)子A1(ABCA1)和載脂蛋白A1(ApoA1)是其合成的關(guān)鍵蛋白。近來(lái)發(fā)現(xiàn)微小RNA-33(miR-33)位于膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋(SREBP)

2、基因內(nèi)含子中，可抑制ABCA1的表達(dá)，調(diào)節(jié)HDL的代謝。肥胖時(shí)紊亂的脂肪因子對(duì)肝臟HDL生成是否產(chǎn)生作用，并且此作用是否與miR-33相關(guān)暫不清楚。
　　目的：
　　建立脂肪細(xì)胞與肝細(xì)胞共培養(yǎng)模型，探討促分化成熟脂肪細(xì)胞及脂肪因子IL-6和Resistin干預(yù)分別對(duì)肝細(xì)胞表達(dá)ABCA1、ApoA1、miR-33a/b及SREBP2/1c等的影響。
　　方法：
　　培養(yǎng)小鼠3T3-L1前體脂肪細(xì)胞，誘導(dǎo)分化至成熟的

3、脂肪細(xì)胞;由行腹部外科手術(shù)患者的皮下脂肪組織中分離培養(yǎng)人脂肪源間充質(zhì)干細(xì)胞(ADSCs)，誘導(dǎo)分化14天至成熟的脂肪細(xì)胞。將人肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞分別與未促分化小鼠3T3-L1及促分化小鼠成熟3T3-L1脂肪細(xì)胞共培養(yǎng)48小時(shí);另外將HepG2細(xì)胞分別與未促分化的人ADSCs及促分化成熟的人ADSCs共培養(yǎng)48小時(shí)。將單獨(dú)培養(yǎng)的HepG2設(shè)為正常對(duì)照組。提取各組細(xì)胞的蛋白及總RNA，通過(guò)Western Blot方法檢測(cè)各組HepG2

4、細(xì)胞ABCA1蛋白表達(dá)量;實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR)比較各組中miR-33a，miR-33b，SREBP-1c，SREBP-2，ABCA1，APOA1基因的相對(duì)表達(dá)量。
　　另外分別以脂肪因子IL-6和Resistin干預(yù)HepG2細(xì)胞，以不加干預(yù)的HepG2細(xì)胞為對(duì)照組，干預(yù)24小時(shí)后提取各組細(xì)胞的蛋白及總RNA，通過(guò)Western Blot方法檢測(cè)各組HepG2細(xì)胞ABCA1蛋白表達(dá)量;Real-time

5、 PCR比較各組中miR-33a，miR-33b，SREBP-1c，SREBP-2，ABCA1，APOA1基因的相對(duì)表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　1、與小鼠脂肪細(xì)胞或人脂肪細(xì)胞共培養(yǎng)均可降低HepG2細(xì)胞ABCA1蛋白及mRNA表達(dá)(P＜0.05);并且同時(shí)可使APOA1 mRNA表達(dá)下降(P＜0.05);
　　2、與對(duì)照組相比，10ng/ml IL-6干預(yù)后HepG2細(xì)胞ABCA1蛋白及mRNA表達(dá)明顯下降(P＜0.05

6、);而ApoA1mRNA表達(dá)無(wú)明顯變化(P＞0.05);
　　3、與對(duì)照組相比，50、100ng/ml Resistin干預(yù)后HepG2細(xì)胞ABCA1蛋白表達(dá)明顯下降(P＜0.05);25ng/ml Resistin干預(yù)后HepG2細(xì)胞ABCA1蛋白表達(dá)無(wú)明顯變化（P＞0.05）;但是各濃度Resistin干預(yù)對(duì)HepG2細(xì)胞ABCA1、ApoA1 mRNA表達(dá)均無(wú)明顯影響（P＞0.05）;
　　4、與小鼠脂肪細(xì)胞或人脂肪細(xì)

7、胞共培養(yǎng)可誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞SREBP2/miR-33a及SREBP-1c/miR-33b表達(dá)下降(P＜0.05);
　　5、IL-6及Resistin干預(yù)后HepG2細(xì)胞SREBP2/miR-33a及SREBP-1c/miR-33b表達(dá)均無(wú)明顯變化（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　應(yīng)用通透性隔離腔(Transwell chamber)系統(tǒng)構(gòu)建小鼠或人脂肪細(xì)胞與人肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞共培養(yǎng)的模型可以誘導(dǎo)HepG2