內(nèi)源性氫化可的松6β-羥基化清除率和血漿氫化可的松濃度分別評價人體內(nèi)CYP3A的表型.pdf

1、本研究用于證明內(nèi)源性氫化可的松6β-羥基化清除率[CLm(6β)]和血漿氫化可的松濃度是否可以可靠的反映人體內(nèi)CYP3A的活性。 方法 1.建立了高效液相紫外檢測法同時測定人血漿和尿中6β-羥基氫化可的松(6β-OHF)及氫化可的松(F)的濃度。 色譜條件：島津2010CHT高效液相色譜儀器，待測物在InertsilPH-3色譜柱上進行分離，紫外檢測波長為245nm，流速為1.0 mL·min<'-1>，使用乙睛

2、和純水的混和溶劑進行梯度洗脫。樣品處理包括兩個步驟：血漿或尿樣上OasisHLB固相萃取柱后被乙酸乙酯一乙醚的混和溶劑洗脫，隨后有機萃取相分別用硫酸鈉飽和的堿液和酸液洗雜質(zhì)。 2.CLm(6β)和體內(nèi)CYP3A的活性的相關性。 用體內(nèi)咪達唑侖口服清除率[CLoral(MDZ)]或者1-羥基咪達唑侖(1-OHMDZ)與咪達唑侖(MDZ)血漿濃度一時間曲線下面積的比值[AUC(MR)]表示體內(nèi)CYP3A的活性。12名健

3、康志愿者口服7.5 mgMDZ，然后采集一系列靜脈血，同時收集各時間段尿樣。血漿中。MDZ、1-OHMDZ和F,尿中F和6p-OHF的濃度均采用高效液相紫外檢測法進行測定。CLm(6β)通過CLm(6β)=X(6β)/AUC(F)計算得到,X(6β)表示某一時間段尿中6β-OHF的累積排泄量。采用Spearman秩相關檢驗比較CLm(6β)和CLoral(MDZ)或AUC(MR)之間的相關性。 3.氫化可的松血漿濃度時間一曲線下

4、面積和AUC(MR)之間的相關性,以及克拉霉素對血漿F水平的影響。 在我們研究CLm(6β)和CLoral(MDZ)或AUC(MR)相關性的實驗中意外發(fā)現(xiàn),兩個時間點血樣的數(shù)據(jù)(10-h和24-h時間點)預測得到的AUC<,0-24h>(F)和AUC(MR)之間存在顯著相關性(r<,s>=-0.736,P=0.006),因此我們設計試驗對兩者的相關性做了進一步考察,并且研究了CYP3A抑制劑克拉霉素對血漿F水平的影響。

5、試驗設計:12名健康志愿者隨機分成兩組。該階段試驗分兩周期進行,兩周期間洗脫2周。在第一周期,一組志愿者每天兩次連續(xù)5天給予克拉霉素,在第5天早上大概08:00所有的志愿者口服7.5 mgMDZ后采集一系列靜脈血,第6天早上第一組志愿者給予最后1次克拉霉素。第二周期交叉重復上述過程。血漿中F,1-OHMDZ和MDZ的濃度均采用高效液相紫外檢測法進行測定。采用Spearman秩相關檢驗比較了AUC<,0-24h>(F)和AUC(MR)之間

6、的相關性,同時采用Wilcoxon秩和檢驗,比較了克拉霉素抑制前后MDZ和1-OHMDZ藥物動力學參數(shù)的變化情況,以及各時間點血漿F濃度的變化情況。 結果 1.測定尿中6β-OHF和F的最低定量限分別為6.9 ng·mL<'-1>和2 ng·mL<'-1>，測定血漿中F的最低定量限為7.8 ng·mL<'-1>，待測物在3個不同的濃度測定得到的準確度在95％和107％之間，批內(nèi)和批間精密度低于6.2％，尿6β-OHF

7、和F的萃取回收率分別為64.1±4.3和88.1±2.4％，血漿中F的萃取回收率為88.7±1.4％。 2.各時間段CLm(6β)CLoral(MDZ)或AUC(MR)之間沒有相關性(P>0.2)，兩個時間點血樣中F的濃度(10-h和24-h)預測得到的AUC<,0-24h>(F)和AUC(MR)存在顯著相關性(r<,s>=-0.736，P=0.006)。 3.兩個時間點血樣中F的濃度(10-h和24-h)預測得到的AU

8、C<,0-24h>(F)和AUC(MR)仍然存在顯著相關性(r<,s>=-0.685，P=0.014)，但是各時間點血漿F濃度在給予CYP3A抑制劑克拉霉素后未發(fā)生顯著變化(p>0.1)。 結論 1.在本研究中我們建立了一個靈敏和可重現(xiàn)的高效液相色譜方法同時測定人體血漿和尿中6β-OBF和F的濃度。 2.CLm(6β)并不能準確的反映人體內(nèi)CYP3A的表型。 3.兩個時間點血樣中F的濃度預測得到的AUC<